蛋白激酶受體2在糖尿病大鼠腎組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:糖尿病腎病是全球終末期腎臟病的最常見病因,嚴(yán)重危害人類的健康。糖尿病腎病的基本病理改變?yōu)槟I小球肥大、基底膜增厚及系膜基質(zhì)聚集,最終導(dǎo)致腎小球硬化;腎小管間質(zhì)纖維化。近年來,蛋白激酶受體(protease-activated receptors,PARs)家族在腎臟疾病方面的作用受到關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)通過觀察PAR-2在糖尿病(DM)大鼠腎組織中的表達(dá)變化,探討其在糖尿病腎病腎小管間質(zhì)纖維化中的可能作用。
　　 方法:隨機(jī)選取Sp

2、rague-Dawley大鼠60只,分為對(duì)照組15只、糖尿病組25只及用藥組20只。使用鏈脲佐菌素(STZ,55mg/kg)腹腔注射,誘發(fā)大鼠糖尿病動(dòng)物模型,正常對(duì)照組大鼠予等量檸檬酸緩沖液腹腔注射。用藥組大鼠自第2周起予奧美沙坦(0.6mg/kg)灌胃治療,其他大鼠給予等量生理鹽水灌胃處理。分別于2周、4周、8周、12周及20周處死大鼠,測(cè)定糖化血紅蛋白、血肌酐及腎重指數(shù),并留取24小時(shí)尿量,測(cè)定尿肌酐及尿白蛋白,留取腎組織標(biāo)本送檢,

3、分別進(jìn)行電鏡觀察,PASM、PAS及Masson染色光鏡下病理觀察。采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)腎臟PAR-2和Ⅳ型膠原(ColⅣ)蛋白的表達(dá),RT-PCR方法檢測(cè)腎組織PAR-2 mRNA的表達(dá),并采用病理圖像分析軟件(美國(guó)Image-ProPlus6.0)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:1.隨著病程延長(zhǎng),糖尿病組大鼠的糖化血紅蛋白(HBA1c)、血肌酐(SCr)、腎重指數(shù)、24h尿蛋白均呈上升趨勢(shì)。其中糖尿病組各時(shí)間點(diǎn)的糖化血紅蛋白、

4、24小時(shí)尿量及24小時(shí)尿蛋白較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05,P＜0.01),示糖尿病動(dòng)物模型成功。
　　 2.免疫組化顯示,對(duì)照組腎小球基底膜和系膜區(qū)Co1Ⅳ有表達(dá),而糖尿病大鼠表達(dá)明顯增加,且隨著病程延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。經(jīng)病理圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)顯示,用藥組大鼠腎組織Co1Ⅳ的表達(dá)較糖尿病組減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 3.免疫組化顯示,糖尿病大鼠PAR-2主要表達(dá)于近曲小管上皮細(xì)胞,腎小球略有表達(dá),而對(duì)照組

5、表達(dá)很少。經(jīng)病理圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)顯示,與對(duì)照組相比,糖尿病大鼠PAR-2表達(dá)明顯增加,且隨著病程延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì),到20W有輕微下降,但用藥組與糖尿病組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。RT-PCR結(jié)果也顯示,與對(duì)照組相比糖尿病大鼠PAR-2表達(dá)明顯增加。
　　 4.病理圖像分析軟件結(jié)果顯示,PAR-2的蛋白表達(dá)水平與肌酐清除率呈負(fù)相關(guān),r為-0.819(P＜0.05);與24小時(shí)尿蛋白呈正相關(guān),r為0.908(P＜0.05)。