多花水仙離體快繁技術(shù)研究及WD40基因表達(dá)分析.pdf

1、多花水仙為石蒜科(Amaryllidaceae)水仙屬（Narcissus L.）多年生球根類花卉，具有較高的經(jīng)濟(jì)和觀賞價(jià)值。長(zhǎng)期的無(wú)性繁殖，大大限制了其繁殖速度且容易造成病毒積累，致使品種退化，抗性減弱。因此，提高多花水仙的抗性，加快其優(yōu)質(zhì)脫毒種苗的生產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)新品種的推廣，對(duì)于多花水仙持續(xù)發(fā)展至關(guān)重要。本研究以‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙鱗莖為材料，研究了不同培養(yǎng)基對(duì)兩個(gè)水仙品種離體培養(yǎng)的影響，篩選出適宜的培養(yǎng)基，為水仙脫毒種苗的生產(chǎn)、種

2、質(zhì)資源的保存和新品種的推廣應(yīng)用提供理論支持和技術(shù)指導(dǎo)，也為水仙品種改良充實(shí)基礎(chǔ)資料。同時(shí)，本研究從福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院遺傳育種研究所獲得的‘云香水仙’轉(zhuǎn)錄組中篩選了與抗性有關(guān)的WD40基因片段，克隆了開(kāi)放閱讀框，并分析了該基因在非生物脅迫下的表達(dá)，以期為水仙品種改良提供參考。主要研究結(jié)果如下：
　　1.本試驗(yàn)探索了‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙的外植體消毒方法和較適培養(yǎng)基，‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙鱗莖盤消毒處理分別以25％的次氯酸鈉溶液

3、浸泡30 min和25 min為好；‘云香水仙’小鱗莖誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基：MS+1.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L2,4-D，白花Ⅱ水仙不定芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基：MS+0.5 mg/L6-BA+0.1 mg/L2,4-D；‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基分別為MS+5.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA和MS+3.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA；‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙繼代的最佳培養(yǎng)基：MS+

4、1.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L2,4-D；‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.05 mg/L IBA+0.1mg/L NAA?！葡闼伞桶谆á蛩呻x體再生體系的建立為轉(zhuǎn)基因育種、原種保存、種質(zhì)資源保存及新品種推廣提供技術(shù)支持。
　　2.通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲得了‘云香水仙’WD40基因（GenBank登錄號(hào)：KU193745），并通過(guò)生物信息學(xué)手段及軟件，對(duì)其結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了分析，并進(jìn)行了功能預(yù)