DHA對2型糖尿病大鼠骨骼肌抗氧酶活性的影響.pdf

1、目的：在糖尿病患者中，95％以上為2型糖尿病(type2 diabetesmellitus，T2DM)，其主要特征是胰島素抵抗。氧化應(yīng)激是胰島素抵抗及2型糖尿病發(fā)生發(fā)展的一個重要原因。
　　組織細胞中的活性氧(reactive oxygen species，ROS)產(chǎn)生過多，超過了抗氧物質(zhì)的清除能力，ROS致使生物大分子(包括脂質(zhì)、蛋白質(zhì)與DNA)氧化，導(dǎo)致氧化應(yīng)激發(fā)生。
　　骨骼肌胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。高血

2、糖長期持續(xù)刺激，使組織中活性氧生成增多，抗氧化系統(tǒng)功能下降，氧化與抗氧化失衡而產(chǎn)生氧化應(yīng)激。二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)是Omega-3不飽和脂肪酸，極易被氧化，具有抗氧化性，那么，DHA是否對T2DM大鼠骨骼肌中的氧化應(yīng)激有改善作用?未見報道。
　　細胞中的抗氧物質(zhì)包括還原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)等強抗氧化劑和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SO

3、D)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-PX)和過氧化氫酶(catalase，CAT)等抗氧酶。如果DHA對T2DM大鼠骨骼肌中的氧化應(yīng)激有改善作用，那么，這種改善是否是通過改變骨骼肌中抗氧酶的活性而實現(xiàn)的呢?未見報道。
　　基于上述目的，本實驗以2型糖尿病大鼠為研究對象，在有無DHA喂養(yǎng)的情況下，觀察大鼠骨骼肌組織中的氧化應(yīng)激及抗氧酶活性的變化情況，為DHA用于2型糖尿病的防治提供實驗依據(jù)

4、。
　　方法：
　　1、動物分組及取材
　　使用本研究組侯連國等人制備的2型糖尿病大鼠的骨骼肌(股四頭肌)為材料。實驗動物分為對照組，糖尿病組和糖尿病+DHA組，取各組骨骼肌用于谷胱甘肽(GSH)含量及抗氧酶活性的測定。
　　2、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的測定
　　采用黃嘌呤氧化酶法進行測定，結(jié)果以每毫克樣本蛋白含有的酶活性單位(U/mg prot)表示。
　　3、骨骼肌組織中銅鋅.超氧化物

5、歧化酶(CuZn-SOD)活性的測定
　　用特異性抑制劑抑制Mn-SOD活性后，再采用黃嘌呤氧化酶法進行測定，結(jié)果以每毫克樣本蛋白含有的酶活性單位(U/mg prot)表示。
　　4、錳-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性的測定
　　用T-SOD活性減去CuZn-SOD的活性，所得結(jié)果可認為是Mn-SOD的活性。結(jié)果同樣以每毫克樣本蛋白含有的酶活性單位(U/mg prot)表示。
　　5、谷胱甘肽(GSH)含量的

6、測定
　　采用二硫代二硝基苯甲酸比色法進行測定，結(jié)果以每毫克樣本蛋白所含的GSH的量(mg/g prot)表示。
　　6、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的測定
　　采用二硫代二硝基苯甲酸比色法測定單位時間內(nèi)消耗的GSH的量，再計算GSH-PX的活性，結(jié)果以每毫克樣本蛋白中含有的酶活性單位(U/mg prot)表示。
　　7、過氧化氫酶(CAT)活性的測定
　　采用鉬酸銨比色法測定單位時間內(nèi)消耗的H2

7、O2的量，再計算CAT的活性，結(jié)果以每毫克樣本蛋白含有的酶活性單位(U/mg prot)表示。
　　結(jié)果：
　　1、總超氧化物岐化酶(T-SOD)活性(U/mg prot)
　　對照組45.29±6.33，糖尿病組34.76±3.79，糖尿病+DHA組40.05±5.04。糖尿病組與對照組相比，糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD的活性明顯降低(P<0.01)；糖尿病+DHA組與糖尿病組相比，雖然差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但糖尿病+

8、DHA組大鼠骨骼肌中T-SOD的活性有所升高。表明，糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD活性明顯降低，而DHA對T-SOD活性的降低有改善的趨勢。
　　2、銅鋅-超氧化物岐化酶(CuZn-SOD)活性(U/mg prot)
　　對照組24.01±4.47，糖尿病組15.78±1.78，糖尿病+DHA組20.96±3.14。糖尿病組與對照組相比，糖尿病大鼠骨骼肌中CuZn-SOD的活性明顯降低(P<0.01)；糖尿病+DHA組與糖尿病

9、組相比，CuZn-SOD的活性明顯升高(P<0.01)。表明，糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD的活性降低可能與CuZn-SOD的活性降低有關(guān)，而DHA對T-SOD活性的降低有改善的趨勢可能與CuZn-SOD的活性升高有關(guān)。
　　3、錳-超氧化物岐化酶(Mn-SOD)活性(U/mg prot)
　　對照組23.93(2.97)，糖尿病組20.85(1.72)，糖尿病+DHA組18.42(0.77)。糖尿病組與對照組相比，糖尿病大鼠

10、骨骼肌中Mn-SOD的活性明顯降低(P<0.01)；糖尿病+DHA組與糖尿病組相比，糖尿病+DHA組大鼠骨骼肌中Mn-SOD的活性降低(P<0.01)。表明，糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD活性的降低可能與Mn-SOD的活性降低有關(guān)，但DHA對Mn-SOD活性的降低沒有改善作用。
　　4、谷胱甘肽(GSH)含量(mg/g prot)
　　對照組1.85(0.99)，糖尿病組2.07(0.76)，糖尿病+DHA組2.21(0.35

11、)。糖尿病組與對照組相比，糖尿病+DHA組與糖尿病組相比，骨骼肌組織中GSH含量的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表明，DHA不影響糖尿病大鼠骨骼肌中GSH的含量。
　　5、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性(U/mg prot)
　　對照組42.12(14.26)，糖尿病組40.49(9.69)，糖尿病+DHA組36.38(10.74)。糖尿病組與對照組相比，糖尿病+DHA組與糖尿病組相比，骨骼肌組織中GSH-P

12、X活性的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表明，DHA不影響糖尿病大鼠骨骼肌中GSH-PX的活性。
　　6、過氧化氫酶(CAT)活性(U/mg prot)
　　對照組1.22(0.26)，糖尿病組1.60(0.78)，糖尿病+DHA組1.24(0.57)。糖尿病組與對照組相比，糖尿病大鼠骨骼肌中CAT的活性升高(P<0.05)；糖尿病+DHA組與糖尿病組相比，雖然CAT活性的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但糖尿病+DHA組大鼠骨骼