兩株無(wú)患子內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物及其抗菌活性研究.pdf

1、微生物是巨大的天然活性產(chǎn)物資源庫(kù)，尤其是植物內(nèi)生菌，作為一種新的微生物資源也受到人們?cè)絹?lái)越多的重視，也有越來(lái)越多的活性物質(zhì)從植物內(nèi)生菌的代謝產(chǎn)物中分離得到。本論文研究了來(lái)源于藥用植物無(wú)患子的兩株內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物及其抗菌活性，主要內(nèi)容包括藥用植物無(wú)患子(Sapindus mukorossi Gaertn.)內(nèi)生真菌的篩選，兩株活性菌株的鑒定及擴(kuò)大培養(yǎng)，菌株代謝產(chǎn)物的成分分離，單體化合物結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性評(píng)價(jià)。
　　本論文采用

2、抗菌活性篩選為主、代謝產(chǎn)物化學(xué)成分預(yù)測(cè)為輔的二級(jí)篩選組合模型，通過(guò)活性初篩、成分復(fù)篩，從無(wú)患子來(lái)源的六株無(wú)患子內(nèi)生真菌(HY11-1、HY11-2、ye5、ye4、P11、O)中篩選出兩株抗菌活性較強(qiáng)的內(nèi)生真菌HY11-1和ye5作為研究對(duì)象。結(jié)合目的菌株的形態(tài)學(xué)觀察和18S rDNA序列分析，菌HY11-1系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示該菌株與鏈格孢(No.HM165489.1)聚在一支，且平板生長(zhǎng)狀態(tài)及顯微鏡觀察結(jié)果與鏈格孢相符，因此將菌HY11-

3、1鑒定為鏈格孢(Alternaria alternate);菌ye5系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示該菌株與赭曲霉(No.AF548065.1)聚在一支，且平板生長(zhǎng)狀態(tài)及顯微鏡觀察結(jié)果與之相符，因此將菌ye5鑒定為赭曲霉(Aspergillus ochraceus)。采用察氏培養(yǎng)基對(duì)菌株HY11-1和ye5進(jìn)行擴(kuò)大發(fā)酵并對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相旋蒸獲得粗提物。
　　利用現(xiàn)代色譜技術(shù)(UV-HPLC等)分離得到10個(gè)單體化合物，其中菌HY11-1

4、來(lái)源有6個(gè)(1-6)，菌ye5有4個(gè)(7-10)。采用波譜技術(shù)(NMR、MS等)鑒定了這些化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分別為tricycloalternarenes3a(1)、di-isobutyl phthalate(2)、tricyclo-alternarenes3b(3)、ACTG toxins F(4)、tricyclo-alternarenes2b(5)、tricycloalternarenes14b(6),circumdatin C(

5、7),circumdatin G(8),10-hydroxyl-3,4-dihydro-3-methyl-1H-1,4-benzodiazepine-2,5-dione(9),環(huán)二肽化合物cyclo-try-pro(10)。其中，化合物6為新化合物。
　　本論文采用梯度稀釋法對(duì)化合物1-10進(jìn)行體外抗菌研究，結(jié)果表明，化合物1-10的體外抑菌能力整體較弱，其中對(duì)于白色念珠菌，化合物4對(duì)其抑制作用最強(qiáng)(MIC值為15.63μM)，化