枸杞多糖對過氧化氫致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：
　　本研究的主要目的是探討枸杞多糖（LBP）對氧化應(yīng)激致大鼠主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（RAEC）損傷的抗凋亡及抗氧化的保護(hù)作用，為進(jìn)一步開發(fā)LBP的藥用價(jià)值提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　方法：
　　培養(yǎng)RAEC，采用CCK-8法篩選建立H2O2缺氧模型和給藥LBP濃度。然后將RAEC隨機(jī)分為5組：正常對照組、H2O2組、H2O2+LBP110μg/ml（low-LBPs treated,LT）組、H2O2+LBP220μ

2、g/ml（medium-LBPs treated,MT）組、H2O2+LBP440μg/ml（high-LBPs treated,HT）組；采用比色法檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）活力，丙二醛（MDA）水平，一氧化氮（NO）水平；Western-blot法檢測細(xì)胞Bcl-2及Bax的表達(dá)及其兩者的比值；倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。使用PI3K/Akt通路的特異性抑制劑渥曼青霉素（Wortmannin,W）對培養(yǎng)細(xì)胞

3、進(jìn)行干預(yù)，將細(xì)胞分為7組：正常對照組、H2O2組、H2O2+LBP440μg/ml組、H2O2+LBP440μg/ml+W組、W組、H2O2+W組、LBP440μg/ml組，采用Western-blot法檢測各組細(xì)胞Bcl-2及Bax的表達(dá)及其兩者的比值。
　　結(jié)果：
　　1、LBP可以增加SOD活力與NO生成，同時(shí)降低MDA含量：與正常對照組比較，H2O2、LT、MT、HT組SOD活力及NO含量明顯降低，MDA含量升高（P

4、＜0.05）；與H2O2組比較，LT、MT、HT組SOD活力及NO含量均升高（P＜0.05），MDA含量均降低（P＜0.05）。
　　2、LBP可以上調(diào)Bcl-2表達(dá)并下調(diào)Bax表達(dá)：與正常對照組比較，H2O2、LT、MT、HT組Bcl-2表達(dá)量降低（P＜0.05），Bax表達(dá)量升高（P＜0.05）；與H2O2組比較，LT、MT、HT組的Bcl-2表達(dá)量升高（P＜0.05），MT、HT組Bax的表達(dá)量下降（P＜0.05）。

5、　　3、形態(tài)學(xué)表達(dá)：倒置顯微鏡觀察，正常對照組細(xì)胞呈梭形，大小一致，邊緣光滑清楚，核清晰，細(xì)胞核大小一致，呈圓形或橢圓形，核染色質(zhì)均勻，細(xì)胞相互嵌合，呈鋪路石狀排列，僅見個(gè)別死細(xì)胞；H2O2組細(xì)胞皺縮，間隙變大，出現(xiàn)灶性細(xì)胞死亡；HT組細(xì)胞可逐漸重新貼壁，與正常細(xì)胞狀態(tài)基本一致。
　　4、渥曼青霉素可逆轉(zhuǎn)Bcl-2及 Bax的表達(dá)：給予渥曼青霉素干預(yù)后，與正常對照組比較，H2O2、H2O2+W組Bcl-2表達(dá)量下降，Bax表達(dá)量升

6、高（P＜0.05）；與H2O2組比較，H2O2+LBP、H2O2+LBP+W、W、LBP組Bcl-2表達(dá)量上升，H2O2+LBP、W、LBP組Bax表達(dá)下降，而H2O2+W組Bax表達(dá)量升高（P＜0.05）；與H2O2+LBP組比較，H2O2+W組Bcl-2表達(dá)量下降，H2O2+W、LBP組Bax表達(dá)量上升（P＜0.05）；與H2O2+LBP+W組相比，H2O2+W組Bcl-2表達(dá)量下降，LBP組Bcl-2升高，H2O2+W組Bax表達(dá)

7、量升高（P＜0.05）；與W組比較，H2O2+W組Bcl-2表達(dá)量下降，LBP組Bcl-2表達(dá)量上升，H2O2+W組 Bax的表達(dá)量上升（P＜0.05）；與H2O2+W組比較，LBP組Bcl-2表達(dá)量上升，Bax表達(dá)量下降（P＜0.05）。與正常對照組比較，H2O2、W、H2O2+W和LBP組Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.05）；與H2O2組比較，H2O2+LBP、H2O2+LBP+W、W和LBP組Bcl-2/Bax比值上升（P＜

8、0.05）；與H2O2+LBP組比較，H2O2+LBP+W、W和H2O2+W組Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.05）；與H2O2+LBP+W組相比，H2O2+W組Bcl-2/Bax比值下降，而LBP組Bcl-2/Bax比值上升（P＜0.05）；與W組比較，H2O2+W組Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.05）；與H2O2+W組比較，LBP組Bcl-2/Bax比值上升（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　枸杞多糖可能通過抗