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文檔簡介
1、甜菜M14品系是由野生白花甜菜(BetacorollifloraZoss.)和二倍體栽培甜菜(BetavulgariL.)通過種間雜交及回交得到的附加白花甜菜9號染色體的單體附加系。M14品系具有兼性無融合生殖的特性,是尋找優(yōu)質(zhì)基因難得的試驗(yàn)材料。
實(shí)驗(yàn)室前期通過差異顯示技術(shù)和抑制消減雜交技術(shù)從甜菜M14品系中獲得了特異表達(dá)基因BvM14-MADSbox的cDNA全長。王玉婷已通過染色體步移獲得BvM14-MADSbox基
2、因的上游序列,通過PCR獲得基因啟動子的序列,初步定名為Pbm,并通過啟動GUS報(bào)告基因的表達(dá)初步驗(yàn)證了Pbm的啟動效率。
本試驗(yàn)利用已獲得的BvM14-MADSbox基因特異啟動子序列設(shè)計(jì)帶有HindⅢ、XbaⅠ酶切位點(diǎn)的PCR引物,構(gòu)建BvM14-MADSbox基因特異啟動子Pbm的pBI/Pbm/BvM14-MADSbox表達(dá)載體。
甜菜M14品系BvM14-CMO基因是鹽誘導(dǎo)表達(dá)基因,通過同源序列克隆
3、法,克隆出BvM14-CMO的cDNA片段。生物信息學(xué)分析該基因全長1341bp,編碼446個氨基酸。后續(xù)工作以該基因作為研究甜菜M14品系參與脅迫反應(yīng)的應(yīng)答基因之一。
甜菜M14品系經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室前期研究具有較強(qiáng)的耐鹽性,可以在500mmol/LNaCl脅迫處理下生長良好。本研究以甜菜M14品系的苗期為研究材料,對其進(jìn)行了0、200、400mmol/L不同NaCl濃度脅迫處理24h后,對合成甜菜M14品系甜菜堿的BvM14-
4、CMO、BvM14-BADH基因進(jìn)行了實(shí)時定量PCR研究發(fā)現(xiàn):甜菜M14品系葉片中兩基因在不同濃度NaCl脅迫處理下相對表達(dá)量一致,隨著濃度的增加,且呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢,在200mmol/LNaCl脅迫處理下兩者相對表達(dá)量最低;甜菜M14品系根中BvM14-CMO、BvM14-BADH的相對表達(dá)量一致,隨著濃度的增加,呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,并且在200mmol/LNaCl脅迫處理下達(dá)到最高。同時采用比色法測定了不同濃度NaCl脅迫
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