大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖、遷移和侵襲特性的影響.pdf

1、目的：探討SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖、遷移和侵襲特性的影響,為深入研究 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為膠質(zhì)瘤基因治療載體的生物安全性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1.采用全骨髓貼壁法獲取SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行原代、傳代培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察。2.通過成脂誘導(dǎo)分化和成骨誘導(dǎo)分化鑒定 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化潛能，采用流式細(xì)胞儀鑒定SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物。3.通過SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和膠質(zhì)瘤C6細(xì)

2、胞Transwell非接觸共培養(yǎng)獲得Con、A1-3、A2-3、A3-3四組膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4.通過CCK-8試驗(yàn)檢測(cè) OD值和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)克隆數(shù)明確膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞增殖特性的改變；通過劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移距離明確膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞遷移特性的改變；通過Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)明確膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞侵襲特性的改變。5.通過裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞增殖特性的影響。
　　結(jié)果：1.第

3、三代SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)均勻，呈梭形，旋渦狀生長(zhǎng)。2.第三代SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)21天，用油紅O染色脂滴呈鮮紅色，圓形，位于胞漿，大的脂滴排列成串、小的脂滴排列簇。成骨誘導(dǎo)分化21天礦化鈣結(jié)節(jié)經(jīng)茜素紅染色后呈橘紅色。3.第三代SD大鼠骨髓間充質(zhì)干流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示：CD29,CD90高表達(dá)，陽性率分別為95.32％和99.97%；CD34,CD45低表達(dá)，陽性率分別為0.08%和0.32%，由此驗(yàn)證提取細(xì)胞是SD

4、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，且純度較高。4. CCK-8實(shí)驗(yàn)提示在24h、48h、72h、96h Con、A1-3、A2-3、A3-3四組膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖活力呈依次遞減趨勢(shì)（P<0.001）。平板克隆實(shí)驗(yàn)提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四組膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞平板克隆14天 GIMSA染色后計(jì)數(shù)，克隆形成數(shù)呈依次遞減（F=190.218，P<0.001）。劃痕實(shí)驗(yàn)提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四組膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞24h遷移距離（

5、um）呈依次遞增（F=1010.726，P<0.001）。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四組膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞48h侵襲率呈依次遞增（F=5150.74，P<0.001）。5.裸鼠體內(nèi)成瘤14天提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四組細(xì)胞形成腫瘤體積依次減小（F=90.46，P<0.001）。
　　結(jié)論：1.采用全骨髓貼壁法可獲取純度較高的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2. SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞