基于骨橋蛋白探討健骨顆粒對去卵巢大鼠骨吸收的影響.pdf

1、目的:
　　以骨橋蛋白為切入點，通過動物實驗探討中醫(yī)補腎健脾方藥健骨顆粒對去卵巢大鼠骨吸收的影響，以進一步明確其防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的作用機制。
　　方法:
　　1.動物分組、造模、灌胃及取材:81只3月齡清潔級雌性SD大鼠，隨機分為2組:假手術(shù)組27只、卵巢切除組54只。卵巢切除組大鼠行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，假手術(shù)組除未行雙側(cè)卵巢結(jié)扎切除外，其余同卵巢摘除組。術(shù)后卵巢摘除組再隨機平均分為生理鹽水組和健骨顆粒組。術(shù)后第三天開

2、始灌胃，假手術(shù)組和生理鹽水組每天灌服生理鹽水2ml/只，健骨顆粒組每天給予健骨顆粒原生藥5.8g/kg/d，以2ml/只生理鹽水溶解顆粒后灌服，每天一次。連續(xù)灌胃4周、8周、12周后，分3批取材，每次隨機選擇9只。取材前一天收集24小時尿液，離心去除沉淀，-80℃凍存，用于尿DPD及尿Cr的檢測;腹主動脈取全血，離心后取血清，-80℃分裝凍存，用于血清TRACP-5b的檢測;分離左側(cè)股骨，用于檢測骨生物力學(xué);分離第三至第五腰椎，用于骨密

3、度檢測;分離第一、第二腰椎，用于OPN、Itgαv和Itgβ3 mRNA及蛋白測定。
　　2.指標(biāo)檢測:應(yīng)用Discovery Wi雙能X線骨密度儀測定腰椎骨密度;應(yīng)用IG-A1000N萬能材料試驗機測定左股骨的最大載荷力;采用ELISA法檢測血清TRACP-5b含量;ELISA法檢測尿液DPD含量;生化法檢測尿液Cr含量;采用實時熒光定量PCR檢測骨組織OPN、Itgαv和Itgβ3 mRNA含量;采用Western Blot法

4、檢測骨組織OPN、Itgαv和Itgβ3蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1.骨密度測定:4周、8周、12周腰椎骨密度指標(biāo)檢測顯示，同期生理鹽水組和健骨顆粒組BMD值均低于假手術(shù)組;生理鹽水組與假手術(shù)組在8周、12周時具有顯著性差異(P＜0.01);同期健骨顆粒組均高于生理鹽水組，在4周時兩者的差異不明顯(P＞0.05)，在8周、12周時具有顯著性差異(P＜0.01)。
　　2.骨骼生物力學(xué)測定:4周、8周、12周大鼠股骨

5、骨骼生物力學(xué)檢測顯示，同期生理鹽水組和健骨顆粒組骨骼最大載荷力均低于假手術(shù)組;生理鹽水組與假手術(shù)組比較具有顯著性差異(P＜0.01);同期健骨顆粒組均高于生理鹽水組，在4周兩者的差異不明顯（P＞0.05），在8周、12周具有顯著性差異（P＜0.01）。
　　3.血清TRACP-5b測定:4周、8周、12周大鼠血清TRACP-5b含量檢測顯示，同期生理鹽水組和健骨顆粒組TRACP-5b含量均高于假手術(shù)組;生理鹽水組與假手術(shù)組比較具有

6、顯著性差異(P＜0.01);同期健骨顆粒組均低于生理鹽水組，且具有顯著性差異(P＜.01)。
　　4.尿DPD/Cr比值:4周、8周、12周大鼠尿DPD/Cr比值結(jié)果顯示，同期生理鹽水組和健骨顆粒組尿DPD/Cr比值均高于假手術(shù)組;生理鹽水組與假手術(shù)組比較具有顯著性差異(P＜0.01);同期健骨顆粒組均低于生理鹽水組，在4周兩者的差異不明顯(P＞0.05)，在8周具有顯著性差異(P＜0.01)，在12周時差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.

7、05)。
　　5.骨組織OPN、Itgαv和Itgβ3 mRNA表達:4周、8周、12周大鼠腰椎組織OPN、Itgαv和Itgβ3的熒光定量PCR檢測顯示，同期生理鹽水組和健骨顆粒組三個指標(biāo)mRNA含量均高于假手術(shù)組，且具有顯著性差異（P＜0.01）;同期健骨顆粒組均低于生理鹽水組，在8周、12周時具有顯著性差異（P＜0.01）。
　　6.骨組織OPN、Itgαv和Itgβ3蛋白表達:4周、8周、12周大鼠腰椎組織OPN、I

8、tgαv和Itgβ3的蛋白印跡實驗檢測顯示，同期生理鹽水組和健骨顆粒組三個指標(biāo)蛋白含量均高于假手術(shù)組，且具有顯著性差異（P＜0.01）;同期健骨顆粒組均低于生理鹽水組，在8周、12周時具有顯著性差異（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.卵巢切除后，上調(diào)了骨組織中OPN、Itgαv和Itgβ3 mRNA及蛋白表達，提升了破骨細(xì)胞的功能活性，進而導(dǎo)致了PMOP的發(fā)生;
　　2.健骨顆粒能下調(diào)骨組織中OPN、Itgαv和I