miRNA-21在人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與調(diào)控研究.pdf

1、研究背景：嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷及外科手術(shù)后常并發(fā)程度不等的增生性瘢痕，影響美觀，甚至導(dǎo)致嚴(yán)重的畸形和功能障礙，降低患者生活質(zhì)量。在增生性瘢痕形成過(guò)程中主要是成纖維細(xì)胞異常增殖與凋亡抑制、分泌和釋放的正向與負(fù)向細(xì)胞因子調(diào)節(jié)機(jī)制的異常以及細(xì)胞外基質(zhì)膠原合成與降解的失平衡。盡管已有很多研究證實(shí)增生性瘢痕與正常皮膚成纖維細(xì)胞之間存在差異，但導(dǎo)致增生性瘢痕形成的內(nèi)在機(jī)制仍有待進(jìn)一步闡明。
　　微小 RNA21（miRNA）作為內(nèi)源性調(diào)控性 RNA

2、，廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等病理生理過(guò)程。我們課題組前期研究顯示人增生性瘢痕組織中miRNA表達(dá)譜較正常人皮膚有顯著改變，其中miRNA-21表達(dá)變化比較明顯，而有較多研究已證實(shí) miRNA-21在細(xì)胞異常增殖如腫瘤和多種纖維化的發(fā)生發(fā)展和演化過(guò)程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。因此我們推測(cè) miRNA-21可能參與增生性瘢痕的形成和演化過(guò)程。
　　目的：觀察miRNA21在體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與調(diào)控變化，分析其與

3、 TGF-β1、Smad7、PDCD4、ColⅠ和Ⅲ型膠原表達(dá)變化的相關(guān)性，為深入闡明增生性瘢痕形成的新機(jī)制及治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：（1）采用組織塊和酶消化相結(jié)合方法，體外培養(yǎng)人增生性瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、蛋白質(zhì)印跡法及免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測(cè)增生性瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞中 miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ及ColⅢ基因和蛋白表達(dá)。（2）通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)

4、染將 miRNA21模擬物導(dǎo)入人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中，采用熒光定量 RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中 miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ、ColⅢ的表達(dá)變化。（3）通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將miRNA21抑制物導(dǎo)入人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ、ColⅢ的表達(dá)變化。
　

5、　結(jié)果：（1）與正常皮膚相比，體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞miRNA21、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表達(dá)顯著升高，而PDCD4低表達(dá)，miRNA21與TGF-β1呈正相關(guān)，與PDCD4呈負(fù)相關(guān)。（2）轉(zhuǎn)染 miRNA21模擬物組人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞 miRNA21、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白表達(dá)均較對(duì)照組明顯增強(qiáng)，而Smad7、PDCD4基因和蛋白表達(dá)均較對(duì)照組明顯下調(diào)。（3）轉(zhuǎn)染miRNA21抑制物組人增生

6、性瘢痕成纖維細(xì)胞Smad7、PDCD4基因和蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯上調(diào)，而 TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白表達(dá)均較對(duì)照組明顯減弱。
　　結(jié)論：（1）miRNA-21、TGF-β1、ColColⅠ、ColⅢ在體外培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常皮膚成纖維細(xì)胞，而 PDCD4及 Smad7表達(dá)顯著低于正常皮膚成纖維細(xì)胞，可能參與增生性瘢痕的形成及演變過(guò)程；（2）miRNA21上調(diào)能促進(jìn)體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖