兔HPRT基因和POU5F1基因的克隆及其打靶載體的構(gòu)建.pdf

1、由于兔在生理，解剖方面比小鼠更加接近人類，所以兔作為疾病模型諸如肥厚性心肌病，脂蛋白代謝紊亂，動(dòng)脈粥樣硬化等方面有著小鼠無法比擬的優(yōu)勢(shì)。除心血管疾病外，兔子在肺部疾病，眼科疾病，藥物毒性試驗(yàn)代謝疾病，獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)，以及癌癥等方面有著廣泛應(yīng)用。利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在其乳腺組織中表達(dá)人源性基因來生產(chǎn)重組治療性蛋白是一種非常經(jīng)濟(jì)、高效的方式。轉(zhuǎn)基因兔在其哺乳期能生產(chǎn)出幾十至幾百克的藥用蛋白，并且己經(jīng)證實(shí)其能有效地表達(dá)具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)

2、的蛋白質(zhì)，所以兔還是一種非常優(yōu)良的乳腺反應(yīng)器。 近來，本實(shí)驗(yàn)室成功建立了體細(xì)胞克隆兔的技術(shù)，這使得通過同源重組結(jié)合核供體細(xì)胞篩選來生產(chǎn)定點(diǎn)修飾的轉(zhuǎn)基因兔成為可能。目前，我們正在建立“基因改造-克隆兔”的技術(shù)平臺(tái)。 本論文主要任務(wù)是為建立“基因改造-克隆兔”的技術(shù)平臺(tái)做一些基礎(chǔ)性工作。整個(gè)實(shí)驗(yàn)主要分兩部分。第一部分，我們利用重組系統(tǒng)克隆了兔．HPRT基因，并成功構(gòu)建了HPRT基因最后三個(gè)外顯子缺失的敲除打靶載體和3'非翻譯