牙鲆血清免疫球蛋白純化、抗體制備及免疫組化研究.pdf

1、牙鲆(Paralichthys olivaceus)是中國沿海網(wǎng)箱及池養(yǎng)的一個(gè)重要魚種,目前病害日趨嚴(yán)重,如大量使用抗生素會(huì)危害人類的食品安全,而利用疫苗防治疾病具有明顯的優(yōu)越性.因此研究魚類免疫系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)和功能,具有重要的理論意義和應(yīng)用前景.制備針對(duì)免疫球蛋白的多克隆或單克隆抗體,作為研究工具,對(duì)免疫器官中產(chǎn)生抗體的組織和細(xì)胞進(jìn)行定位,可以了解免疫器官在防御疾病過程中是如何發(fā)揮作用的,以便對(duì)應(yīng)用疫苗奠定理論基礎(chǔ).制備多克隆或單克隆

2、抗體的關(guān)鍵就是分離純化出盡可能多的純度較高的免疫球蛋白,為此該文對(duì)免疫球蛋白的純化進(jìn)行了探討,并制備了多克隆抗體和應(yīng)用免疫組化方法對(duì)牙鲆的主要免疫器官進(jìn)行了研究.運(yùn)用兩種方法對(duì)牙鲆的血清免疫球蛋白進(jìn)行分離純化,證明了Sephacryl S-200和HiTrap rProtein A Sepharose在純化牙鲆血清免疫球蛋白的有效性,并純化了一定量的牙鲆血清免疫球蛋白,同時(shí)測定了牙鲆血清免疫球蛋白的分子量為836kDa,其重鏈分子量為7

3、5.4kDa,具有分子量分別為29.9kDa和28.3kDa的兩類輕鏈.以提純的免疫球蛋白為抗原免疫新西蘭大白兔制備了兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗體,用免疫雙擴(kuò)散法檢測多克隆抗體效價(jià)1:32,免疫斑點(diǎn)法檢測多克隆抗體效價(jià)至少為1:2000以上.運(yùn)用免疫印記法檢測了兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗體的特異性,實(shí)驗(yàn)證明其能與牙鲆全血清中免疫球蛋白重鏈、輕鏈反應(yīng),而與人血清IgM無交叉反應(yīng).利用自制的兔抗牙鲆血清免疫球蛋白多克隆抗體研究了產(chǎn)生