Cajal間質細胞及P物質在大鼠脊髓損傷后腸功能障礙中的作用.pdf

1、目的:
　　脊髓損傷(Spinal cord injury，SCI)可致患者感覺、運動功能喪失，自主神經(jīng)功能障礙。在自主神經(jīng)功能障礙中，腸功能障礙嚴重影響患者的生活質量，被認為是需要最優(yōu)先、迫切解決的問題之一。既往研究顯示，脊髓損傷后腸功能障礙與神經(jīng)遞質-P物質的變化有關，但是否存在其受體的變化并不清楚。另外，Cajal間質細胞(interstitial cells of cajal，ICC)作為胃腸道慢波的起搏細胞，與胃腸電活動

2、傳播、神經(jīng)遞質傳遞等密不可分，它是否參與脊髓損傷后腸功能障礙的發(fā)生尚未見報道。因此，通過動物實驗來研究脊髓損傷后腸功能障礙中P物質及其受體NK1R以及ICC的變化十分必要。在成功建立脊髓損傷模型的基礎上，觀察大鼠脊髓損傷后脊髓及結腸組織的病理變化;檢測脊髓損傷后結腸生物電活動以及ICC的變化;研究脊髓損傷后脊髓及結腸組織中P物質及其受體的變化，進一步探討脊髓損傷后腸功能障礙的形成機制。
　　方法:
　　1.大鼠脊髓損傷模型的

3、建立。采用改良Allen裝置以10g·25cm強度打擊大鼠T10硬脊膜，建立大鼠脊髓損傷模型。
　　2.行為學檢測。以正常組大鼠為參照，采用BBB評分觀察大鼠行為學變化，通過比較篩選出造模后BBB評分為“0-1”的大鼠進行實驗。
　　3.一般觀察。以假手術組大鼠為參照，肉眼觀察脊髓損傷后結腸的變化。
　　4.病理學觀察。以正常組、假手術組大鼠為參照，對SCI后脊髓損傷組織行EC染色，對SCI后大鼠近端結腸組織行HE染色

4、，觀察其病理變化特點。
　　5.結腸生物電活動檢測。以正常組、假手術組大鼠為參照，利用生物電記錄儀檢測SCI后1周、2周、4周大鼠近端結腸生物電活動變化。
　　6.ICC檢測。以正常組、假手術組大鼠為參照，利用免疫熒光、Western Blot檢測SCI后1周、2周、4周大鼠結腸組織中ICC的變化。
　　7.P物質及其受體NK1R檢測。以正常組、假手術組大鼠為參照，利用免疫熒光雙標、Western Blot分別檢測SC

5、I后1周、2周、4周大鼠脊髓和結腸組織中P物質及其受體NK1R的變化。
　　結果:
　　1.行為學檢測:BBB評分:脊髓損傷后大鼠BBB功能評分為0-1分，提示脊髓損傷后大鼠雙下肢完全癱瘓。
　　2.一般觀察:脊髓損傷后結腸組織充血、水腫明顯，腸腔內可見較多干結糞粒。
　　3.病理學觀察:(1)EC染色:正常組、假手術組中大鼠脊髓白質髓鞘分布均勻，排列緊密;損傷組大鼠脊髓損傷處白質脫髓鞘明顯，局部空洞形成。(2)

6、HE染色:正常組、假手術組大鼠近端結腸絨毛上皮細胞排列整齊;損傷組大鼠近端結腸絨毛上皮細胞倒伏、脫落，粘膜層及肌層的厚度增加。
　　4.結腸生物電活動檢測:正常組、假手術組大鼠近端結腸生物電活動較規(guī)律;損傷組近端結生物電紊亂，振幅變異較大，且波形較不穩(wěn)定。
　　5.ICC檢測:脊髓打擊損傷1周時結腸組織內Cajal間質細胞陽性細胞數(shù)目為57.38±4.69，較正常組、假手術組明顯減少(P＜0.01）;損傷2周時結腸組織內Ca

7、jal間質細胞陽性細胞數(shù)目為32.26±3.62，與正常組和假手術相比，其陽性細胞數(shù)明顯減少(P＜0.01）;損傷4周時結腸組織Cajal間質細胞陽性細胞數(shù)目為25.07±3.05，明顯少于正常組、假手術組(P＜0.01)。脊髓打擊損傷后結腸組織中c-kit蛋白表達呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢，其中，損傷4周時c-kit蛋白表達為0.409±0.117，與正常組相比，其表達量明顯減少(P＜0.01）。
　　6.P物質檢測:打擊損傷組1周時脊

8、髓損傷上段前角P物質表達為0.158±0.060，與正常組、假手術組相比未見明顯差別(P＞0.05）;2周時P物質在脊髓損傷上段前角表達為0.323±0.098，較正常組、假手術組明顯增加(P＜0.01);4周時P物質在脊髓損傷上段前角表達為0.199±0.048，與正常組、假手術組相比未見明顯差別(P＞0.05）。脊髓打擊損傷1周時P物質在脊髓損傷下段前角表達為0.090±0.009，與正常組、假手術組相比有所減少(P＜0.05）;2

9、周時P物質在脊髓損傷下段前角表達為0.280±0.027，明顯高于正常組、假手術組(P＜0.01）;4周時脊髓損傷下段前角P物質表達為0.129±0.022，與正常組、假手術組相比未見明顯差別（P＞0.05）。脊髓打擊損傷1周后結腸組織P物質為0.239±0.091，與正常組、假手術組相比，P物質含量減少(P＜0.05);脊髓打擊損傷2周時結腸組織P物質含量為0.233±0.056，較正常組、假手術組明顯減少(P＜0.01）;脊髓打擊損

10、傷4周時結腸組織中P物質含量為為0.206±0.041，明顯少于正常組、假手術組(P＜0.01)。
　　7.NK1R檢測:大鼠脊髓損傷后，脊髓組織中NK1R表達隨時相點變化呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢。其中，損傷1天時脊髓NK1R表達最低，為0.978±0.414;損傷28天時脊髓NK1R表達為1.771±0.685，與假手術組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.大鼠脊髓損傷后結腸腸腔內可見較多干結