柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的制備及其在小鼠體內(nèi)的代謝研究.pdf

1、現(xiàn)有研究表明柿單寧具有清除自由基、抗氧化、抑制腫瘤、降血脂等多種生理活性，但其構(gòu)效關(guān)系尚不明確。由于柿單寧結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，因此研究其特征結(jié)構(gòu)單元對(duì)于其活性的貢獻(xiàn)有助于闡明其構(gòu)效關(guān)系。目前對(duì)于柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元制備主要采用凝膠色譜柱法和高效液相色譜法，存在制備量小，效率低等問題。本文研究了中壓制備液相色譜純化柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的工藝條件，并對(duì)其在的小鼠體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)以及代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析，旨在為闡明柿單寧的生物活性和構(gòu)效關(guān)系提供參考。

2、r>　　1.采用中壓液相色譜制備柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元
　　以柿單寧為原料，甲醇和水作為流動(dòng)相，采用中壓液相色譜快速制備系統(tǒng)和Flash column C18色譜柱(20-35μm，60(A))初步分離純化兩種柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元，然后利用半制備高效液相色譜進(jìn)一步提高兩種二聚體的純度并制備收集，最后通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和確認(rèn)，得到了純度分別為97.2％和95.4％的A型EGCG二聚體和A型ECG二聚體

3、。
　　2.柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的體內(nèi)藥代學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　利用5％的吐溫80對(duì)超濾膜進(jìn)行預(yù)處理，降低超濾膜與藥物之間的非特異性吸附，最終測定A型EGCG二聚體的血漿蛋白結(jié)合率為88.02％-92.49％，A型ECG二聚體的血漿蛋白結(jié)合率為93.35％-96.46％。柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元表現(xiàn)出一定的濃度依賴效應(yīng)，隨著藥物濃度增加，血漿蛋白結(jié)合率也有一定程度的增大，并且A型ECG二聚體的血漿蛋白結(jié)合率稍大于A型EGCG二聚體?？紤]到兩種

4、二聚體血漿蛋白結(jié)合率較高，我們首先利用EGCG單體建立了一套簡單、快捷、準(zhǔn)確的血漿樣品前處理藥代學(xué)方法，并驗(yàn)證了該方法對(duì)兩種A型二聚體的適用性。通過Pksolver軟件分析了小鼠靜脈注射劑量為50mg/kg的A型兩種二聚體時(shí)的藥代學(xué)參數(shù)，小鼠靜脈注射A型EGCG和ECG二聚體的半衰期t1/2分別為120.54min和37.41min，血漿濃度最高時(shí)間Tmax均為5min，血漿中二聚體的最大濃度Cmax為32.56μg/mL和55.05μ

5、g/mL，藥時(shí)曲線下面積AUC(0-t)分別為1949.42μg/mL*min和2112.48μg/mL*min，平均滯留時(shí)間MRT分別為170.11min和40.38min，兩種A型二聚體在小鼠體內(nèi)存留時(shí)間短，代謝消除速度較快，作用時(shí)間較短。
　　3.柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的血漿、尿液代謝產(chǎn)物分析
　　采用高分辨率質(zhì)譜對(duì)兩種二聚體在小鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，A型EGCG和ECG二聚體均能在血漿和尿液樣本中檢測到。