小G蛋白Ran與GlyRS相互作用調控乳蛋白合成的初步研究.pdf

1、乳蛋白合成的機理是重要的生命科學基礎問題之一，近年來的研究已有一些明顯的進展。細胞核和細胞液之間如何應答氨基酸信號從而調節(jié)乳蛋白的合成，仍是現今泌乳生物學領域尚待解決的重要科學問題。Ran作為一個重要的細胞增殖因子，在多種細胞活動中發(fā)揮作用，包括DNA復制，細胞核膜重建，紡錘體的形成，物質的核漿轉運等。國內外關于Ran基因與甘氨酰tRNA合成酶在奶牛乳腺發(fā)育過程中表達及相互作用的研究鮮有報道。本研究以泌乳期奶牛乳腺上皮細胞為模型。探索R

2、an基因與甘氨酰tRNA合成酶的相互作用，在奶牛乳腺中的調節(jié)作用，為動物乳腺發(fā)育和泌乳調節(jié)機制的研究提供基礎資料，為人工調節(jié)乳品質和乳產量提供理論依據。
　　本研究以中國荷斯坦奶牛作為實驗動物，采用組織塊培養(yǎng)法，培養(yǎng)并純化體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞，用蛋白質免疫印記（WB）和免疫熒光（IF）檢測細胞中角蛋白18（CK18）和酪蛋白（CSN2）的表達以鑒定細胞的純度和泌乳功能。實驗通過在培養(yǎng)液中添加0.6 mmol/L的蛋氨酸，建立

3、了細胞的泌乳模型。檢測添加蛋氨酸泌乳模型中，Ran過表達后GlyRS的表達顯著上升（p<0.01）。
　　以體外培養(yǎng)的泌乳期奶牛乳腺上皮細胞為研究對象，采用共定位技術初步檢測Ran與GlyRS是否相互作用，采用Western blotting技術探索在泌乳過程中Ran的與GlyRS成正相關。構建重組質粒PEX-7-Ran（Ran-RFP）和實驗室構建成功的GlyRS-GFP，對細胞進行瞬時轉染，進行熒光能量共振轉移實驗，用相關軟件