HCN離子通道起搏功能的分子基礎(chǔ).pdf

1、近年心臟起搏器技術(shù)的進(jìn)展，為心跳徐緩的病人提供了一個挽救生命的治療方法。然而心臟起搏器只是一種能緩解癥狀，而不能根治疾病的療法，而且安裝起搏器有重大的健康風(fēng)險(如感染或死亡)，其費(fèi)用也十分高昂，并需要定期更換電池及導(dǎo)線。此外對年輕病人而言，由于他們的心臟細(xì)小且正在發(fā)育，故置入起搏器特別困難，因此迫切需要一種新的治療方法，來解決這一問題。 心臟的起搏受控于一類存在于心臟竇房結(jié)被稱作lf的離子通道，該通道是被細(xì)胞膜的超極化所激活，是

2、起搏功能的重要組成成分。HCN是一類被命名為超極化激活及環(huán)化核苷酸調(diào)控的陽離子通道，這類基因編碼的蛋白即可產(chǎn)生1f電流，該基因已經(jīng)被克隆，是目前基因治療心率失常的研究熱點(diǎn)。 本文選取mHCN1，mHCN2基因?yàn)檠芯繉ο?，采用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)，用分子生物學(xué)手段將慢病毒表達(dá)載體pLL3.7進(jìn)行改造：即將其原有的mU6啟動子敲除，在XbaⅠ和NOtⅠ之間插入真核表達(dá)啟動子EF-1α和靶基因。隨后使用慢病毒包裝系統(tǒng)和表達(dá)系統(tǒng)轉(zhuǎn)染293FT

3、細(xì)胞，收獲病毒，感染工具細(xì)胞和靶細(xì)胞，分析mHCN1和mHCN2表達(dá)的電流的不同，并選取可使電流增強(qiáng)的病毒注射心室壁做體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，使?jié)撛谄鸩?xì)胞變成起搏細(xì)胞，切除天然起搏結(jié)構(gòu)一竇房結(jié)，檢測起搏重建。 經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體可以長期穩(wěn)定表達(dá)目的基因，記錄到的電流大小情況是：HCNl-ΔEVYl＞HCNlE272A＞HCNlE272A-ΔEVY＞HCNlWT；HCN2E324A＞HCN2WT＞HCN2-ΔEVY＞HCN E3