GM-CSF及其受體在食管癌中的表達(dá)及作用研究.pdf

1、[研究目的]
　　粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granolocyte-macrophage-colony stimulatingfactor，GM-CSF)是血液系統(tǒng)最常見(jiàn)的生長(zhǎng)因子之一，其與特異性受(GMCSFR)體結(jié)合后可促進(jìn)血細(xì)胞的分化和成熟、促進(jìn)機(jī)體免疫功能的發(fā)揮。研究表明，GM-CSF在多種惡性腫瘤如頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌中表達(dá)上調(diào)，并可通過(guò)免疫依賴(lài)和非免疫依賴(lài)兩種途徑調(diào)控腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展，但其在食

2、管癌中的研究較少。據(jù)此，本研究擬從蛋白和組織水平探究GM-CSF及其受體在食管癌中的表達(dá)情況，并從基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床回顧性分析水平明確GM-CSF在食管癌中的作用。
　　[研究方法]
　　1.GM-CSF及其受體在食管癌中的表達(dá)水平檢測(cè)
　　1.1通過(guò)蛋白質(zhì)印跡(WB)檢測(cè)食管癌Eca109細(xì)胞和9706細(xì)胞GM-CSF及其受體表達(dá)水平;
　　1.2采用免疫組織化學(xué)試驗(yàn)(IHC)檢測(cè)食管癌病理標(biāo)本中GM-CSF及其受

3、體表達(dá)水平，根據(jù)染色強(qiáng)度和染色面積進(jìn)行評(píng)分，依次將其分級(jí)為陰性、低表達(dá)和高表達(dá);
　　2.GM-CSF在食管癌中的作用研究
　　2.1外源性GM-CSF刺激對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　2.1.1應(yīng)用Cell Counting Kit-8(CCK-8)實(shí)驗(yàn)，比較GM-CSF刺激組和對(duì)照組Eca109細(xì)胞在24h、48h、72h和96h的增殖能力差異;
　　2.1.2采用流式細(xì)胞術(shù)，探究GM-CSF

4、刺激組和對(duì)照組Eca109細(xì)胞凋亡能力的差異;
　　2.1.3通過(guò)計(jì)數(shù)細(xì)胞穿過(guò)Transwell小室基膜的數(shù)量評(píng)估GM-CSF刺激組和對(duì)照組Eca109細(xì)胞遷移和侵襲能力的不同;
　　2.2 GM-CSF在放療中變化水平對(duì)治療效果的預(yù)測(cè)作用
　　2.2.1應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)食管癌患者在放療過(guò)程中血清GM-CSF水平的變化，Log-Rank檢驗(yàn)分析其與預(yù)后的關(guān)系;
　　2.2.2應(yīng)用Cox比例風(fēng)

5、險(xiǎn)模型分析GM-CSF變化是否為獨(dú)立預(yù)后因素。
　　[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]
　　1.GM-CSF及其受體在食管癌中的表達(dá)水平
　　1.1通過(guò)WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)GM-CSF在Eca109細(xì)胞和9706細(xì)胞中均有一定程度表達(dá)，GM-CSFR在Eca109細(xì)胞中表達(dá)陽(yáng)性，9706細(xì)胞中表達(dá)較低(p＜0.05);
　　1.2本研究共分析93例食管癌患者病理標(biāo)本，其中GM-CSF陽(yáng)性率為100％，41例為高表達(dá)，52例為低表達(dá)，GM-CS

6、FR陽(yáng)性率為55.9％，其中45例為高表達(dá)，7例為低表達(dá)，41例為陰性;
　　2.GM-CSF的抗腫瘤作用研究
　　2.1外源性GM-CSF刺激對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　2.1.1 Eca109細(xì)胞在GM-CSF刺激后72h(p=0.001)和96h(p=0.003)增殖能力較對(duì)照組明顯降低，但在24h和48h兩組細(xì)胞的增殖能未見(jiàn)顯著差異(p＞0.05);
　　2.1.2 Eca109細(xì)胞在加

7、入GM-CSF的無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)后，凋亡細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組無(wú)明顯變化(p＞0.05)，提示GM-CSF對(duì)凋亡可能無(wú)影響;
　　2.1.3 Eca109細(xì)胞在GM-CSF刺激后穿過(guò)Transwell小室基膜的數(shù)量較對(duì)照組明顯下降(p＜0.05)，證明其可顯著抑制細(xì)胞的遷移和侵襲能力;
　　2.2血清GM-CSF在放療中變化趨勢(shì)對(duì)治療效果的預(yù)測(cè)
　　2.2.1研究共分析54例食管癌患者，23例在治療過(guò)程中血清GM-C

8、SF水平上升，31例下降，上升組總生存期(p=0.002)和無(wú)進(jìn)展生存期(p=0.001)均明顯高于下降組;
　　2.2.2 GM-CSF變化為獨(dú)立預(yù)后因素(p=0.001，HR:0.244，95％CI:0.106-0.564)，且預(yù)后效應(yīng)強(qiáng)于疾病分期(p=0.001，HR:0.275，95％CI:0.127-0.596)。
　　[結(jié)論]
　　GM-CSF及其受體在食管癌中有一定表達(dá)水平。外源性應(yīng)用GM-CSF可顯著抑