EMT相關蛋白和hTERT在成釉細胞瘤中的表達及臨床意義.pdf

1、成釉細胞瘤是常見的發(fā)生于頜骨內(nèi)的牙源性上皮來源的腫瘤，世界各地均有發(fā)病報道，發(fā)病率占所有牙源性腫瘤的11％-18％。成釉細胞瘤多為良性病變，但具有頜骨內(nèi)浸潤性生長和易復發(fā)的生物學特性，造成頜骨嚴重破壞，腫瘤的侵襲性生長特性決定了手術往往需要擴大切除頜骨組織，造成患者生活質(zhì)量下降。依據(jù)臨床及放射線特征和組織病理學特征，成釉細胞瘤分為實性/多囊型、單囊型、外周型和促結(jié)締組織增生型。實型/多囊型最為常見，包括濾泡型和叢狀型兩大主要類型，又包括

2、棘皮瘤亞型、顆粒細胞亞型和基底細胞型等變異類型。有研究表明，濾泡型的侵襲性和復發(fā)性稍高于其他組織學分型，而單囊型的復發(fā)性較低，?？刹捎帽Ｊ氐耐饪菩g式進行治療。目前對于成釉細胞瘤的腫瘤形成機制和侵襲性機制尚不完全明確。
　　侵襲性是指細胞通過細胞間和細胞外基質(zhì)的屏障遷移至鄰近組織，這一過程有多種基因及其產(chǎn)物的表達/激活參與。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是上皮細胞喪失其極性和黏附性而具有間質(zhì)細胞特性，運動遷移能力增強，抗凋亡能力增強。許多研

3、究表明，EMT在腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移機制中具有重要作用。多條信號通路包括TGF-beta，F(xiàn)GF,EGF,HGF,Wnt/beta-catenin and Notch以及氧化應激都參與EMT的發(fā)生。E-cadherin是維持上皮細胞之間相互連接，保持上皮表型的重要黏附分子，E-cadherin減少或丟失是EMT發(fā)生的關鍵事件。Vimentin是中間絲的一種蛋白，主要分布于間質(zhì)細胞中，如出現(xiàn)在上皮源性腫瘤中則是EMT的表現(xiàn)，與細胞的生長

4、分化狀態(tài)以及細胞游走遷移有關。Wnt家族信號在胚胎發(fā)育及組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)中調(diào)控細胞增殖、細胞極性，該通路異常激活會促進腫瘤發(fā)生。Beta-catenin作為Wnt通路的關鍵因子參與多種細胞過程包括細胞的黏附、生長、分化;同時與E-cadherin分子的胞漿內(nèi)部分形成復合物參與細胞間連接，復合物結(jié)構(gòu)破壞會導致細胞黏附下降，侵襲和遷移能力增高。
　　端粒是真核生物染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)(TTAGGG)n，具有維持染色體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，防止染色體

5、降解、重組、融合及染色體結(jié)構(gòu)基因丟失的作用。端粒隨著體細胞有絲分裂逐漸縮短，最終導致細胞衰老凋亡。端粒結(jié)構(gòu)異常則會導致染色體末端發(fā)生融合及重組，增加基因的不穩(wěn)定性。端粒酶催化端粒的合成并維持其長度。正常成人體細胞中幾乎不表達端粒酶活性，在大多數(shù)惡性腫瘤細胞中都有端粒酶的表達。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)端粒酶活性的決定性因素，多種轉(zhuǎn)錄因子及信號通路、表觀遺傳學修飾參與hTERT表達的調(diào)控。有研究表明，hTERT啟動子區(qū)有Wnt/β-C

6、atenin通路的作用靶點，在腫瘤形成中發(fā)揮作用。
　　目的:本實驗通過研究E-cadherin、Vimentin和β-catenin在成釉細胞瘤中的表達變化初步探討成釉細胞瘤的侵襲性生長中是否存在EMT，并對hTERT在成釉細胞瘤中的表達情況及臨床相關性進行分析，初步探討成釉細胞瘤中hTERT的甲基化調(diào)控機制。
　　方法:本研究收集2004-2011年中國醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院外科手術切除的人成釉細胞瘤、鱗狀細胞癌的組織標本

7、和存檔蠟塊，正常口腔黏膜來自于下頜第三磨牙拔除術。腫瘤病例按照WHO(2005)頭頸部腫瘤診斷標準及分類由兩位以上病理醫(yī)師進行診斷分型。1、利用免疫組織化學法檢測臨床組織標本中E-cadherin、Vimentin、β-catenin和hTERT在組織中的定位及表達情況。2、免疫印跡方法檢測臨床標本中E-cadherin、Vimentin、β-catenin和hTERT的表達情況。3、利用RT-PCR方法檢測臨床標本中hTERT mRN

8、A的表達。4、應用亞硫酸鹽修飾DNA后擴增測序法(BSP)檢測hTERT基因啟動子區(qū)的甲基化程度。
　　結(jié)果:1、免疫組化結(jié)果顯示成釉細胞瘤中E-cadherin在外周柱狀或立方狀上皮細胞膜表達降低或丟失，Vimentin主要在間質(zhì)強陽性表達，在瘤上皮細胞也有陽性表達，E-cadherin與Vimentin的表達成負相關。同時β-catenin在上皮細胞膜表達有所下降，出現(xiàn)了細胞漿/細胞核異位表達。2、蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果表明，與正

9、?？谇火つは啾?，E-cadherin和β-catenin在腫瘤上皮表達量有所下降，而Vimentin表達量升高。hTERT在成釉細胞瘤中表達量高于正常黏膜。3、免疫組化結(jié)果顯示，hTERT在正?？谇火つぁ⒊捎约毎?、牙源性角化囊性瘤和口腔鱗癌中均有陽性表達，分別為28.6％、72.9％、75.6％、90.1％，表達情況存在顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。成釉細胞瘤原發(fā)和復發(fā)、不同病理分型hTERT表達水平均存在顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.0

10、5)。4、檢測了30例成釉細胞瘤標本的hTERT啟動子上游調(diào)控區(qū)21個CpG位點，第5CpG位點甲基化程度最高100％(30/30)，第15位點最低為50％(15/30)。
　　結(jié)論:1、E-cadherin在成釉細胞瘤上皮中的表達量降低，伴隨間質(zhì)標志物Vimentin表達升高，β-catenin出現(xiàn)異位表達，提示在成釉細胞瘤侵襲過程中存在EMT。2、hTERT在成釉細胞瘤中為陽性表達，表達量高于正常黏膜組，且隨著腫瘤復發(fā)表達率升