2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩103頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、帕金森病(PD)是一種中老年常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性變性疾病,其病理學(xué)特征表現(xiàn)為中腦黑質(zhì)致密部(SNc)多巴胺(DA)能神經(jīng)元選擇性、進(jìn)行性喪失和殘存DA能神經(jīng)元內(nèi)Lewy小體(主要成分為alpha-synuclein)的形成。盡管如此,其具體發(fā)病機(jī)制仍不太清楚。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明,保守型多巴胺能神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)因子(CDNF)CDNF不僅能顯著改善6-OHDA誘導(dǎo)的PD模型大鼠行為,還能對(duì)其中腦黑質(zhì)致密部的DA能神經(jīng)元變性具有顯著的保護(hù)和逆轉(zhuǎn)復(fù)

2、蘇作用。
  因此,本研究目的首先在于明確CDNF對(duì)蛋白酶體抑制誘導(dǎo)的PD模型是否具有神經(jīng)保護(hù)和逆轉(zhuǎn)作用,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索其對(duì)蛋白酶體表達(dá)水平、水解酶活性的調(diào)控作用。以此來(lái)論證這種“CDNF—蛋白酶體—保護(hù)和逆轉(zhuǎn)DA能神經(jīng)元”新型神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的設(shè)想,闡明蛋白酶體系統(tǒng)功能活性在“CDNF保護(hù)和逆轉(zhuǎn)DA能神經(jīng)元變性機(jī)制”中的作用,為CDNF對(duì)DA能神經(jīng)元變性保護(hù)和逆轉(zhuǎn)作用機(jī)制的研究開辟新靶點(diǎn)。
  方法:研究一、CDNF對(duì)蛋

3、白酶體抑制誘導(dǎo)DA能神經(jīng)元變性的作用
  首先,構(gòu)建CDNF基因重組桿狀病毒表達(dá)載體Bacmid-CDNF,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞,采取Bac-to-Bac蛋白表達(dá)系統(tǒng),按照分子克隆方法完成CDNF蛋白的大量表達(dá)、鑒定和純化,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用。選取PC12細(xì)胞株作為誘導(dǎo)PD細(xì)胞模型細(xì)胞株。將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為五組分別是:實(shí)驗(yàn)組(Lactacystin/MG132)、CDNF+Lactacystin組、CDNF+MG132組、Lactacy

4、stin+CDNF組和MG132+CDNF組。先將PC12細(xì)胞種植在96孔板上(細(xì)胞密度達(dá)到2×105/ml)孵育24h。為了探討索CDNF對(duì)PC12細(xì)胞株的神經(jīng)保護(hù)作用,在細(xì)胞進(jìn)行Lactacystin/MG132誘導(dǎo)前施加200nM的CDNF作用6h,然后再分別加入12.5μM Lactacystin或5μM MG132誘導(dǎo)24h。為了探討CDNF對(duì)PC12細(xì)胞的神經(jīng)逆轉(zhuǎn)作用,先分別對(duì)其加入12.5μM Lactacystin或5μ

5、M MG132進(jìn)行誘導(dǎo)24h,然后再分別加入相同劑量(200nM)CDNF進(jìn)行共孵育24h。最后通過MTT法檢測(cè)PC12細(xì)胞活性、TH免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)以及免疫熒光技術(shù)檢測(cè)alpha-synuclein蛋白的表達(dá)量。
  研究二、CDNF對(duì)蛋白酶體表達(dá)以及水解酶活性的調(diào)控作用
  首先,構(gòu)建CDNF基因重組桿狀病毒表達(dá)載體Bacmid-CDNF,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞,采取Bac-to-Bac蛋白表達(dá)系統(tǒng),按照分子克隆方法

6、完成CDNF蛋白的大量表達(dá)、鑒定和純化,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用。選取PC12細(xì)胞株作為誘導(dǎo)PD細(xì)胞模型細(xì)胞株。將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為五組分別是:實(shí)驗(yàn)組(Lactacystin/MG132)、CDNF+Lactacystin組、CDNF+MG132組、Lactacystin+CDNF組和MG132+CDNF組。先將PC12細(xì)胞種植在96孔板上(細(xì)胞密度達(dá)到2×105/ml)孵育24h。為了探討CDNF對(duì)蛋白酶體的保護(hù)作用,在細(xì)胞進(jìn)行Lactacystin

7、/MG132誘導(dǎo)前施加200nM的CDNF作用6h,然后再分別加入12.5μM Lactacystin或5μM MG132誘導(dǎo)24h。為了探討CDNF對(duì)蛋白酶體的逆轉(zhuǎn)作用,先分別對(duì)其加入12.5μM Lactacystin或5μM MG132進(jìn)行誘導(dǎo)24h,然后再分別加入相同劑量(200nM)CDNF進(jìn)行共孵育24h。最后通過ELISA法檢測(cè)26s蛋白酶體的表達(dá)以及谷氨酰肽水解酶、糜蛋白酶和胰蛋白酶的含量。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析CDNF對(duì)Lacta

8、cystin/MG132誘導(dǎo)前后的蛋白酶體和三種水解酶的表達(dá)情況,以及Lactacystin與MG132兩種蛋白酶體抑制劑之間對(duì)蛋白酶體和三種水解酶作用的差異。
  結(jié)果:研究一、CDNF對(duì)蛋白酶體抑制誘導(dǎo)DA能神經(jīng)元變性的作用
  就其細(xì)胞活性而言,通過MTT法檢測(cè),PC12細(xì)胞經(jīng)12.5μM Lactacystin或5μM MG132誘導(dǎo)24h后,其細(xì)胞活性分別降低79.1%和78.6%,兩者之間的活性下降情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義(p>0.05)。就其形態(tài)學(xué)而言,通過免疫熒光檢測(cè)顯示,細(xì)胞未經(jīng)蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)前細(xì)胞數(shù)量多、分別均勻、核大而圓、核漿界限清晰、胞漿濃縮,誘導(dǎo)后細(xì)胞數(shù)量減少、胞體皺縮變小、結(jié)構(gòu)不清。為了探討索CDNF對(duì)PC12細(xì)胞株的神經(jīng)保護(hù)和逆轉(zhuǎn)作用,在細(xì)胞進(jìn)行Lactacystin/MG132誘導(dǎo)前施加200nM的CDNF作用6h,MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞活性分別下降至52.3%和49.7%,與實(shí)驗(yàn)組相比CDNF的神經(jīng)保護(hù)作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(對(duì)L

10、actacystin:p<0.05、對(duì)MG132:p<0.01);而在細(xì)胞進(jìn)行Lactacystin/MG132誘導(dǎo)后施加200nM的CDNF作用24h,細(xì)胞活性分別下降至59.5%和56.2%,與實(shí)驗(yàn)組相比CDNF的神經(jīng)逆轉(zhuǎn)作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(對(duì)Lactacystin:p<0.05、對(duì)MG132:p<0.01)。其形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)其無(wú)論細(xì)胞數(shù)量、胞體形態(tài)及核漿界面均較未經(jīng)CDNF處理的要明顯改善。就其胞漿中蓄積的alpha-synuc

11、lein蛋白檢測(cè)結(jié)果而言,經(jīng)12.5μM Lactacystin或5μM MG132誘導(dǎo)24h后,其細(xì)胞內(nèi)alpha-synuclein熒光光密度定量檢測(cè)分別為2.1755和2.8990。在Lactacystin/MG132誘導(dǎo)前經(jīng)200nM的CDNF作用6h,其表達(dá)alpha-synuclein的細(xì)胞數(shù)量減少,其熒光光密度分別下降至1.3871和1.1710,較實(shí)驗(yàn)組其光密度值下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);而在細(xì)胞進(jìn)行Lacta

12、cystin/MG132誘導(dǎo)后施加200nM的CDNF作用24h,其熒光光密度分別下降至1.4899和1.2958,較實(shí)驗(yàn)組其光密度值下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
  研究二、CDNF對(duì)蛋白酶體表達(dá)以及水解酶活性的調(diào)控作用
  就26s蛋白酶體表達(dá)而言,通過MTT法檢測(cè),PC12細(xì)胞經(jīng)12.5μM Lactacystin或5μM MG132誘導(dǎo)24h后,其26s蛋白酶體活性分別,較正常的未處理細(xì)胞組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

13、<0.05)。為了探討索CDNF對(duì)蛋白酶體表達(dá)的作用,在細(xì)胞進(jìn)行Lactacystin/MG132誘導(dǎo)前施加200nM的CDNF作用6h,MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)26s蛋白酶體表達(dá)明顯上調(diào),較實(shí)驗(yàn)組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),而且MG132組較Lactacystin組作用更明顯,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05);而在細(xì)胞進(jìn)行Lactacystin/MG132誘導(dǎo)后施加200nM的CDNF作用24h,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MG132組的26s蛋白酶體表達(dá)上調(diào)

14、明顯,較實(shí)驗(yàn)組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),而Lactacystin組上調(diào)不明顯,較實(shí)驗(yàn)組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。就其蛋白酶體中的三種水解酶而言,實(shí)驗(yàn)組的三種水解酶較未處理組而言均下降明顯,與未處理組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。為了探討索CDNF對(duì)蛋白酶體中三種水解酶(谷氨酰肽水解酶、糜蛋白酶和胰蛋白酶)表達(dá)的作用,在Lactacystin/MG132誘導(dǎo)前后分別加入200nM的CDNF進(jìn)行干預(yù)。檢測(cè)結(jié)果顯示CD

15、NF對(duì)MG132與Lac誘導(dǎo)的谷氨酰肽水解酶均有保護(hù)作用(p<0.05),而且二者之間的作用程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05);CDNF對(duì)谷氨酰肽水解酶均有逆轉(zhuǎn)作用(p<0.05),且MG132相較Lactacystin而言作用更明顯(p<0.05)。CDNF對(duì)MG132誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞糜蛋白酶有保護(hù)作用(p<0.05),而對(duì)Lactacystin誘導(dǎo)的糜蛋白酶無(wú)保護(hù)作用(p>0.05);CDNF對(duì)糜蛋白酶沒有逆轉(zhuǎn)作用(p>0.05),

16、盡管MG132相比Lactacystin而言作用更明顯。CDNF對(duì)Lactacystin所抑制的胰蛋白酶無(wú)保護(hù)作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),而對(duì)MG132所作用的胰蛋白酶具有保護(hù)作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),但是對(duì)二種蛋白酶體抑制劑所作用的胰蛋白酶無(wú)逆轉(zhuǎn)作用(p>0.05)。
  結(jié)論:1.CDNF對(duì)MG132/Lactacystin所誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞變性具有保護(hù)和逆轉(zhuǎn)作用,而且二者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;
  2.C

17、DNF對(duì)MG132/Lactacystin誘導(dǎo)的26s蛋白酶體具有保護(hù)作用,而MG132比Lac保護(hù)作用更好;CDNF對(duì)MG132作用的26s蛋白酶體具有逆轉(zhuǎn)作用,而對(duì)Lac作用的26s蛋白酶體無(wú)逆轉(zhuǎn)作用;
  3.CDNF對(duì)MG132/Lacatacystin誘導(dǎo)的谷氨酰肽水解酶均有保護(hù)作用,二者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;CDNF對(duì)谷氨酰肽水解酶均有逆轉(zhuǎn)作用,MG132比Lac具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
  4.CDNF對(duì)MG132所抑制的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論