白果內(nèi)酯耐缺氧、抗疲勞、抗氧化作用的研究.pdf

1、研究背景:白果內(nèi)酯（bilobalide，BB）是從銀杏科植物銀杏中提取的唯一的倍半萜類物質(zhì)。銀杏葉提取物（EGB）的藥理作用研究較多，銀杏葉提取物具有抑制心肌收縮力、減慢心率、降低心肌耗氧量、舒張血管和內(nèi)臟平滑肌，增加冠脈流量，降血壓，以及其他藥理作用。EGB對心絞痛，心肌梗死、高血壓和心律失常等心腦血管性疾病有良好的療效。研究發(fā)現(xiàn)白果內(nèi)酯可以降低動物血壓、減慢心率和增加冠脈流量；白果內(nèi)酯還對心肌缺血再灌注損傷有顯著的保護作用；同時還

2、可以拮抗血小板激活因子引起的血小板異常聚集和血栓形成從而降低血漿粘度和全血粘度；白果內(nèi)酯對神經(jīng)也具有保護作用。但白果內(nèi)酯耐缺氧、抗疲勞、抗氧化等作用目前未見報道。因此，我們主要研究白果內(nèi)酯的耐缺氧、抗疲勞、抗氧化等作用。通過觀察小鼠常壓耐缺氧實驗、斷頭后喘息實驗，抗異丙腎上腺素引起的心肌耗氧量實驗，研究白果內(nèi)酯的耐缺氧作用；通過觀察小鼠負重游泳的存活時間，探究白果內(nèi)酯抗疲勞作用；通過觀察大鼠血清中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽

3、過氧化物酶活力，探討白果內(nèi)酯的抗氧化作用。
　　目的:本研究擬通過1、觀察小鼠常壓耐缺氧實驗、斷頭后喘息實驗，抗異丙腎上腺素引起的心肌耗氧量實驗，闡明白果內(nèi)酯的耐缺氧作用；2、通過觀察小鼠負重游泳的存活時間以及血乳酸、血尿素氮的濃度和肌酸激酶活性、肝糖原和肌糖原的含量。探究白果內(nèi)酯抗疲勞作用及作用機制；3、通過觀察大鼠血清丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽過氧化物酶活力，探討白果內(nèi)酯的抗氧化作用及作用機制。
　　通過本

4、項目的研究為白果內(nèi)酯挖掘更多的藥理作用提供有價值的基礎研究資料。
　　方法:
　　1、①耐缺氧實驗一：取健康昆明種小鼠30只，每組6只，隨機分為溶劑(1％DMSO)對照組，陽性藥物（1%普萘洛爾20.0mg/kg）對照組，2.5、5.0、10.0mg/kg的白果內(nèi)酯組，灌胃給藥，給藥后25min，將小鼠放入250ml的磨口廣口瓶中，密封（瓶內(nèi)墊有濾紙，用以吸收尿液，每瓶放1只小鼠，瓶口涂以凡士林以防漏氣）觀察白果內(nèi)酯對小鼠常

5、壓耐缺氧的影響；
　?、谀腿毖鯇嶒灦喝〗】道ッ鞣N小鼠40只，每組8只，隨機分為溶劑(1%DMSO)對照組，陽性藥物（1%普萘洛爾20.0mg/kg）對照組，1.0、2.5、5.0mg/kg白果內(nèi)酯組，灌胃給藥，給藥25min后，快速斷頭，觀察白果內(nèi)酯對小鼠斷頭呼吸的影響；
　?、勰腿毖鯇嶒炄喝〗】道ッ鞣N小鼠36只，每組6只，隨機分為模型組、陽性藥對照組、溶劑(1%DMSO)對照組、5.0、10.0、20.0mg/kg的白

6、果內(nèi)酯組。模型的制備：異丙腎上腺素模型組按照15mg/kg劑量給小鼠皮下注射異丙腎上腺素。造模后5min給藥，20min后，將小鼠放入250ml的磨口廣口瓶中，密封（瓶內(nèi)墊有濾紙，用以吸收尿液，每瓶放1只小鼠，瓶口涂以凡士林以防漏氣）觀察小鼠常壓耐缺氧的影響，觀察白果內(nèi)酯對小鼠抗異丙腎上腺素的耐缺氧的影響。
　　2、抗疲勞實驗：
　?、倏蛊趯嶒炓唬喝〗】道ッ鞣N小鼠28只，每組7只，隨機分為溶劑(1%DMSO)對照組，2.0

7、、4.0、8.0mg/kg白果內(nèi)酯組。每日灌胃一次，連續(xù)6天，給藥后20min，小鼠游泳，水溫28℃，每日游泳時間10min。結(jié)束給藥后次日小鼠負重游泳（2g），觀察小鼠游泳力竭時間(力竭判斷的標準：小鼠頭部沉入水中5 s不能浮出水面)，研究白果內(nèi)酯對抗疲勞作用的影響。
　　②抗疲勞實驗二：結(jié)束給藥后次日，采血取材，測定血乳酸、血尿素氮的濃度和肌酸激酶活性。研究白果內(nèi)酯對血乳酸、血尿素氮、肌酸激酶作用的影響。
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8、驗三：結(jié)束給藥后次日，直接麻醉取材，測定肝糖原與肌糖原含量。研究白果內(nèi)酯對肝糖原與肌糖原含量的影響。
　　3、抗氧化實驗：取健康SD大鼠30只，每組6只，隨機分為溶劑（1%DMSO）對照組，VE（50.0mg/kg）陽性對照組，2.0、4.0、8.0mg/kg白果內(nèi)酯組。每日灌胃給藥一次，連續(xù)給藥8天。末次給藥后次日，心臟取血，分離血清。
　　1）測定血清中丙二醛的含量；
　　2）測定血清中超氧化物歧化酶活性；

9、　　3）測定血清中谷胱甘肽過氧化物酶的活力。
　　研究白果內(nèi)酯對丙二醛的含量、超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽過氧化物酶的活力的影響以及白果內(nèi)酯抗氧化作用機制。
　　結(jié)果:
　　1、耐缺氧實驗：
　?、倌腿毖鯇嶒炓唬号c溶劑對照組比較，2.5、5.0、10.0mg/kg的白果內(nèi)酯均能顯著延長昆明種小鼠常壓耐缺氧條件下的存活時間(P<0.05；P<0.01)；
　?、谀腿毖鯇嶒灦号c溶劑對照組比較，2.5、5.0m

10、g/kg的白果內(nèi)酯均能顯著延長昆明種小鼠斷頭后的喘息時間(P<0.05；P<0.01)；
　　③耐缺氧實驗三：與溶劑對照組比較，10.0、20.0mg/kg的白果內(nèi)酯能顯著延長異丙腎上腺素引起的心肌耗氧增加昆明種小鼠常壓耐缺氧條件下的存活時間(P<0.05；P<0.01)。
　　說明白果內(nèi)酯對常壓耐缺氧、斷頭后的喘息、異丙腎上腺素引起的缺氧具有顯著的保護作用。
　　2、抗疲勞實驗：與溶劑對照組比較，4.0、8.0mg/

11、kg的白果內(nèi)酯組均能顯著延長小鼠游泳存活的時間。
　　與溶劑對照組比較，4.0、8.0mg/kg的白果內(nèi)酯組均能顯著增加小鼠肝糖原和肌糖原含量(P<0.05；P<0.01)，顯著減少血尿素氮和乳酸生成(P<0.05；P<0.01)，明顯降低小鼠肌酸激酶的活性(P<0.05；P<0.01)，使乳酸脫氫酶活性顯著增強。
　　說明白果內(nèi)酯能對抗游泳引起疲勞，具有明顯的抗疲勞作用。
　　3、抗氧化實驗：
　　1）與溶劑對

12、照組比較，4.0、8.0mg/kg的白果內(nèi)酯均能顯著降低SD大鼠丙二醛(MDA)的含量(P<0.05；P<0.01)；
　　2）與溶劑對照組比較，4.0、8.0mg/kg的白果內(nèi)酯均能顯著升高超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05；P<0.01)；
　　3）與溶劑對照組比較，4.0、8.0mg/kg的白果內(nèi)酯均能顯著升高谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力(P<0.05；P<0.01)。
　　說明白果內(nèi)酯具有顯著