趨化因子CCL20與Th17細(xì)胞在IgA腎病發(fā)病機(jī)制中的相互作用.pdf

1、目的：檢測(cè)趨化因子CCL20在IgAN患者的表達(dá)水平，探討其受體CCR6在外周血免疫細(xì)胞的表達(dá)，并探究他們與Th17細(xì)胞在IgAN之間的相互作用，為IgAN的發(fā)病機(jī)制提供一條新思路。
　　方法：
　　1、用IgAN患者血清與人腎小球系膜細(xì)胞孵育24小時(shí)，運(yùn)用RT-PCR技術(shù)篩選出高表達(dá)的趨化因子；運(yùn)用Jacalin-Agrose親和層析法提取IgAN患者血清和健康人血清中的IgA1，然后分別與腎小球系膜細(xì)胞孵育24小時(shí)，再通

2、過(guò)RT-PCR檢測(cè)兩組CCL20的mRNA表達(dá)水平；再用ELISA的方法直接檢測(cè)IgAN及健康人兩組血清中CCL20的表達(dá)水平。
　　2、通過(guò)transwell趨化實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞分析了解CCL20優(yōu)先趨化的細(xì)胞及其受體在哪種（哪幾種）細(xì)胞上表達(dá)水平較高。
　　3、通過(guò)胞內(nèi)因子染色實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞因子表達(dá)譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCR6+細(xì)胞與Th17細(xì)胞之間的關(guān)系。
　　4、應(yīng)用免疫組化和免疫熒光技術(shù)分別檢測(cè)CCL20、T細(xì)胞及Th17細(xì)

3、胞三者在IgAN患者腎臟組織、其他腎病組織及癌旁組織的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、趨化因子CCL20在IgAN患者血清與HMC孵育后的表達(dá)上升；且無(wú)論是檢測(cè)兩組血清提取的IgA1與HMC孵育，還是單測(cè)IgAN患者和健康對(duì)照組的血清，結(jié)果均是CCL20的表達(dá)水平在IgAN患者組顯著高于健康對(duì)照組；
　　2、趨化因子CCL20優(yōu)先趨化外周血T細(xì)胞（成熟T細(xì)胞），并且其受體CCR6在成熟T細(xì)胞中表達(dá)水平及平均熒光強(qiáng)度都較高；

4、
　　3、CCR6+T細(xì)胞主要是分泌IL-17的Th17細(xì)胞，它們分泌炎癥因子到引起腎臟損傷或者形成免疫炎癥反應(yīng)進(jìn)一步損傷；
　　4、用免疫組化法檢測(cè)在IgAN患者組織檢測(cè)到CCL20，而對(duì)照組則否；用免疫熒光法檢測(cè)到CD3+CCR6+IL-17+細(xì)胞的存在，而對(duì)照組則否。
　　結(jié)論：在IgAN中CCL20的高表達(dá)引起CCR6+T細(xì)胞（主要是Th17細(xì)胞）的高表達(dá)，Th17細(xì)胞通過(guò)分泌大量的炎癥因子和細(xì)胞因子進(jìn)一步引起