背側(cè)紋狀體GABAAα1亞基在ATS成癮機(jī)制中的研究.pdf

1、目的:
　　1.研究GABAAα1參與甲基苯丙胺(Methamphetamine，METH)成癮相關(guān)獎(jiǎng)賞記憶的機(jī)制;
　　2.研究miRNA和泛素化系統(tǒng)通過(guò)調(diào)控GABAAα1表達(dá)，參與METH成癮相關(guān)獎(jiǎng)賞記憶的機(jī)制。
　　方法:
　　采用代表 METH成癮相關(guān)獎(jiǎng)賞記憶的條件位置偏愛(ài)的大鼠動(dòng)物模型（Conditioned place preference，CPP)作為研究工具，圍繞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)起主要抑制性作用的G

2、ABAA受體展開(kāi)研究，特別聚焦于在神經(jīng)中樞分布最廣泛的含有α1的GABAA受體。
　　結(jié)果:
　　一、GABAAα1參與了METH成癮相關(guān)獎(jiǎng)賞記憶機(jī)制的形成
　　在使用METH制作 CPP模型以后,western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有背側(cè)紋狀體（Dorsal striatum，Dstr）的GABAAα1蛋白表達(dá)下調(diào)，Real-Time PCR顯示GABAAα1 mRNA的表達(dá)水平?jīng)]有變化。其他四個(gè)腦區(qū)（內(nèi)側(cè)前額葉皮層、

3、伏隔核、杏仁核、背側(cè)海馬）的GABAAα1蛋白表達(dá)沒(méi)有改變，其它一些常見(jiàn) GABAA亞型（GABAAα2、GABAAα3、GABAAα5、GABAAβ2）蛋白表達(dá)也沒(méi)有改變。進(jìn)一步，我們向雙側(cè)Dstr微注射GABAA受體激動(dòng)劑muscimol或?qū)Ｒ恍葬槍?duì)α1GABAA受體的激動(dòng)劑zolpidem都可以明顯減弱METH誘發(fā)的CPP的形成。我們的發(fā)現(xiàn)提示Dstr的GABAAα1在METH獎(jiǎng)賞記憶形成中具有非常重要的作用。
　　二、ME

4、TH成癮過(guò)程中，泛素化連接酶SYVN1參與調(diào)控了GABAAα1的下調(diào)
　　我們先后從miRNA和泛素化的角度研究影響GABAAα1下調(diào)的因素：在miRNA的研究中，我們首先用生物信息學(xué)軟件、文獻(xiàn)報(bào)道和前期的芯片研究結(jié)果預(yù)測(cè)了21個(gè)最有可能調(diào)控GABAAα1的miRNA，然后用Real-Time PCR的方法進(jìn)行篩查，但是沒(méi)有篩查出調(diào)控GABAAα1的miRNA，提示METH-CPP大鼠Dstr的GABAAα1的表達(dá)下調(diào)，可能不是由

5、miRNA參與調(diào)控的。
　　在泛素化的研究中，我們發(fā)現(xiàn)泛素化過(guò)程參與了 METH-CPP的形成和GABAAα1的表達(dá)下調(diào)，更深入的研究發(fā)現(xiàn)泛素化連接酶SYVN1參與了這個(gè)過(guò)程，我們用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)和原代紋狀體神經(jīng)元的慢病毒干擾實(shí)驗(yàn)均證實(shí) SYVN1參與調(diào)控了GABAAα1的表達(dá)下調(diào)。提示抑制SYVN1誘導(dǎo)的GABAAα1降解，是改善METH成癮導(dǎo)致的GABAAα1下調(diào)的有效途徑。
　　結(jié)論:
　　Dstr的GABAAα