兩種腫腿蜂的核型及RAPD研究.pdf

1、川硬皮腫腿蜂S.sichuanensisXiao和管氏腫腿蜂SclerodermaguaniXiaoetWu屬膜翅目Hymenoptera、腫腿蜂科Bethylidae，天牛腫腿蜂屬Sclerdermasp，都是外寄生蜂，是鉆蛀性害蟲(chóng)的重要天敵。本文對(duì)這兩種腫腿蜂進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)研究，為揭示其種間關(guān)系、起源和演化提供必要的資料；并對(duì)它們及川硬皮腫腿蜂種內(nèi)四種分化類(lèi)型進(jìn)行RAPD遺傳多樣性分析，為腫腿蜂的進(jìn)一步研究如遺傳育種奠定基礎(chǔ)，從而為研

2、究腫腿蜂的變異時(shí)期、變異機(jī)制、變異因素及誘導(dǎo)良性變異做準(zhǔn)備。 在研究方法和制片技術(shù)探究的基礎(chǔ)上，本研究對(duì)其進(jìn)行了核型分析，結(jié)果如下： 1)最佳制片流程：腫腿蜂雌成蟲(chóng)卵巢在0.01％秋水仙素水溶液中預(yù)處理10min，經(jīng)蒸餾水低滲5min，用甲醇、冰醋酸(3：1)固定液固定15min，Giemsa染色液染色30min，冰凍揭片(液氮)，中性樹(shù)膠封片。 2)兩種腫腿蜂染色體數(shù)目均為2n(♀)=30，川硬皮腫腿蜂S.si

3、chuanensisXiao的核型公式為2n(♀)=4m+20sm+6st，核型為3B型；管氏腫腿蜂SclerodermaguaniXiaoetWu核型公式為2n(♀)=4m+18sm+8st，核型為2B型。 本試驗(yàn)對(duì)川硬皮腫腿蜂和管氏腫腿蜂基因組DNA的提取方法和RAPD-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系及程序優(yōu)化方法進(jìn)行了探討，結(jié)果如下： 1)基因組DNA提取結(jié)果顯示，蛋白酶K法得到的基因組DNA濃度合適，蛋白質(zhì)含量低，可以用于P

4、CR擴(kuò)增。 2)最佳體系為25ul中MgCl23.5mM/L，TaqDNA聚合酶1.5U，DNA濃度37.5ng，dNTP150uM/L，DTT0.3mM；較優(yōu)化的擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性1min45sec，94℃變性30sec，36℃退火45sec，72℃延伸2min，45個(gè)循環(huán)后72℃延伸5min。 3)用篩選出來(lái)的8個(gè)引物對(duì)川硬皮腫腿蜂的四種分化類(lèi)型及管氏腫腿蜂進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出48個(gè)位點(diǎn)(分子量在50～1000之間

5、)，平均每個(gè)引物產(chǎn)生6個(gè)，其中多態(tài)性位點(diǎn)33個(gè)，占總位點(diǎn)數(shù)的68.9％。表明它們之間具有豐富的多態(tài)性。 4)引物D20中分子量為398bp的帶可能是小型個(gè)體的標(biāo)記帶；引物B10中，分子量為602bp的帶可能是川硬皮腫腿蜂寄生率高的特異性標(biāo)記帶；引物B16中分子量為446bp的帶可能是體形較大的這種外型特征的特異性標(biāo)記帶。 5)川硬皮腫腿蜂種內(nèi)各群體在引物A19、B10、B11、B16、B17、C9、D20和F1的平均sh

6、annon信息指數(shù)為0.1220，表明川硬皮腫腿蜂種內(nèi)有較大的遺傳多樣性，存在相當(dāng)?shù)倪z傳分化。而川硬皮腫腿蜂種內(nèi)的四種分化類(lèi)型中，Ⅰ和Ⅱ之間的遺傳相似度為0.8371，Ⅲ和Ⅳ之間的遺傳相似度為0.8710，均大于它們分別與其它兩種類(lèi)型的遺傳相似度；聚類(lèi)分析顯示Ⅰ和Ⅱ首先聚在一起，Ⅲ和Ⅳ優(yōu)先聚在一起；表明Ⅰ和Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ的基因組DNA差異較小，而Ⅰ和Ⅲ、Ⅳ，Ⅱ和Ⅲ、Ⅳ之間在基因上的差異較大。 6)川硬皮腫腿蜂和管氏腫腿蜂之間的平均遺