高等植物中miRNA相關基因研究.pdf

1、miRNA是存在于高等生物中的一類長度約為21nt的小分子RNA。miRNA基因是由基因組編碼的，其轉錄產物是具有莖環(huán)二級結構的miRNA前體：pri-miRNA，pri-miRNA經(jīng)過一系列的加工成為成熟的miRNA分子。在植物miRNA產生過程中，RNaseⅢ類型的酶Dicer-like起著重要的作用。miRNA分子最終組裝入RNA介導的沉默復合體(RISC)中，并且指導該復合體對靶基因的mRNA進行切割或抑制其翻譯，以調節(jié)靶基因的

2、表達，從而調節(jié)植物體的生長發(fā)育。 水稻OsDCL1蛋白負責水稻miRNA的加工與成熟，對水稻的正常生長發(fā)育起著重要的調控作用。為了研究水稻miRNA代謝的機理，我們首先篩選了與OsDCL1相互作用的蛋白。我們以OsDCL1蛋白的PAZ結構域作為誘餌，對水稻cDNA文庫進行篩選，找到了若干個候選蛋白，并對其中的一個蛋白OsNOT2進行了互補驗證。 在擬南芥和水稻中，Argonaute(AGO)蛋白由一個大的基因家族編碼。A

3、GO蛋白都具有PAZ和Piwi兩個保守的結構域，AGO是RISC的核心組分，在miRNA功能途徑中發(fā)揮著重要的作用。我們對擬南芥和水稻中的AGO基因家族成員進行了進化分析，確定了不同成員之間的同源關系。為了研究每個AGO蛋白在小分子RNA代謝和調節(jié)植物生長發(fā)育中的作用，我們希望鑒定在每個通路中包含的蛋白。作為第一步，我們克隆了擬南芥AtAGO7和AtAGO10基因的全長cDNA，并且在大腸桿菌系統(tǒng)中表達并純化了AtAGO1蛋白的N端來用