DNA損傷標(biāo)志物γH2AX在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成過程中的作用研究.pdf

1、目的：
　　氧濃度變化誘導(dǎo)產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管，以往認(rèn)為促血管生成因子過度表達(dá)是血管新生的原因，但DNA損傷是否與視網(wǎng)膜新生血管有關(guān)，以往無此方向研究。本研究探討參與DNA損傷修復(fù)的磷酸化蛋白γH2AX與小鼠視網(wǎng)膜新生血管的關(guān)系。
　　方法：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　將C57BL/6J小鼠分為四組：正常組、氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）空白對(duì)照組、OIR陽(yáng)性干擾組、O IR陰性干擾組。采用視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光法對(duì)比觀察氧誘

2、導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形態(tài)學(xué)變化。取四組中17日齡小鼠視網(wǎng)膜組織行視網(wǎng)膜鋪片，免疫熒光法觀察對(duì)比四組視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面積大小及γH2AX表達(dá)情況。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　將人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）分為四組：正常組、低氧模型空白對(duì)照組、低氧模型陽(yáng)性干擾組、低氧模型陰性干擾組。細(xì)胞處理后12小時(shí)收樣，應(yīng)用免疫熒光法比較HUV EC不同組間γH2 AX的表達(dá)情況，應(yīng)用免疫印跡法定量檢測(cè) HU VEC不同組間γH2A

3、X的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分
　　視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光結(jié)果顯示，OIR模型建立成功。四組17日齡小鼠視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面積比較，總體差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ F=437.623、93.047，均有P<0.01），兩兩比較，OIR空白對(duì)照組、OIR模型陰性干擾組小鼠視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面積均較正常組明顯增大（LSD-t檢驗(yàn)：P<0.01），OIR模型陽(yáng)性干擾組小鼠視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面

4、積均較OIR空白對(duì)照組和OIR模型陰性干擾組明顯減?。↙SD-t檢驗(yàn)：P<0.01）。17日齡小鼠視網(wǎng)膜γH2AX焦點(diǎn)團(tuán)聚集出現(xiàn)情況與新生血管和無灌注區(qū)面積大小變化趨勢(shì)相一致。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分
　　四組HUVEC的免疫熒光染色γH2AX焦點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=64.970，P<0.01）。進(jìn)一步兩兩比較，低氧模型空白對(duì)照組、低氧模型陰性干擾組γH2AX焦點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)較正常組明顯增大（LSD-t

5、檢驗(yàn)：P<0.01），低氧模型陽(yáng)性干擾組較低氧模型空白對(duì)照組和低氧模型陰性干擾組明顯減?。↙SD-t檢驗(yàn)：P<0.01）。免疫印跡法定量檢測(cè)HUVEC不同組間γH2AX的表達(dá)量與免疫熒光趨勢(shì)相一致。免疫印跡法在蛋白水平的定量檢測(cè)結(jié)果與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫熒光趨勢(shì)相一致。
　　結(jié)論：
　　缺氧環(huán)境下，γH2AX在小鼠視網(wǎng)膜血管和體外培養(yǎng)的 HUVEC中均大量表達(dá)。γH2AX的表達(dá)與視網(wǎng)膜血管新生有關(guān)。低氧誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)反應(yīng)可能與