海洋石油降解菌的分離鑒定及其在海洋石油污染生物修復(fù)中的應(yīng)用研究.pdf

1、由于全球性廣泛的石油生產(chǎn)、運(yùn)輸、使用和處置，在許多環(huán)境特別是海洋環(huán)境中，石油污染已經(jīng)成為一個(gè)普遍而嚴(yán)重的問(wèn)題。目前，我國(guó)沿海地區(qū)海水含油量已超過(guò)國(guó)家規(guī)定的海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)2～8倍。本文以原油或柴油為唯一碳源從廈門(mén)近海表層海水樣品中通過(guò)富集篩選得到了2組降解菌群。從柴油富集物中分離得到了2株細(xì)菌，經(jīng)16SrDNA鑒定分別屬于假單胞菌屬(Pseudomonaspseudoalcaligenes，97％)和食烷菌屬(Alcanivoraxdies

2、elolei，99％)。從原油富集物中分離得到了7株細(xì)菌，經(jīng)16SrDNA鑒定，分別屬于不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacterradioresistens，99％)、生絲單孢菌屬(Hyphomonasjohnsonii，99％)、食烷菌屬(Alcanivoraxborkumensis，99％)、根瘤菌屬(Mesorhizobiumloti，96％)、赤細(xì)菌屬(Erythrobacterflavus，93.58％)、玫瑰桿菌屬(Roseo

3、bactergallaeciensis，95.81％)和希瓦氏菌屬(Shewanellaaquimarina，99％)。其中，GY-2和Y-2與赤細(xì)菌屬和玫瑰桿菌屬已報(bào)到的其它種的16SrDNA同源性最高，但也僅為93.58％和95.81％。GY-2能產(chǎn)H2S；能利用萘、蒽、菲等多環(huán)芳烴作為生長(zhǎng)的唯一碳源；對(duì)青霉素敏感；除含有赤細(xì)菌屬的主要脂肪酸C18:1ω7c外還含有脂肪酸C16:0；G+C含量為62.0～62.2％，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GY

4、-2是屬于赤細(xì)菌屬的一個(gè)新種，命名為芳烴赤細(xì)菌(Erythrobacteraromatiphilus)。Y-2能在37℃生長(zhǎng)；有將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽的能力；除含有玫瑰桿菌屬共有的主要脂肪酸C18:1外，還含有C18:0和C16:0兩種主要脂肪酸；G+C含量為62.4％，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Y-2是屬于玫瑰桿菌屬的一個(gè)新種，命名為廈門(mén)玫瑰桿菌(Roseobacterxiamengensis)。 通過(guò)對(duì)分離得到的單菌的功能進(jìn)行研究，選取了

5、實(shí)驗(yàn)室保藏的6株柴油降解菌構(gòu)建了一個(gè)柴油降解菌群。通過(guò)柴油降解率的測(cè)定、殘油組分的GC-MS檢測(cè)分析和菌群結(jié)構(gòu)變化的PCR-DGGE檢測(cè)對(duì)該混合菌群進(jìn)行了優(yōu)化，最終得到一組含有2HE-4、PN3-2和B-5三株細(xì)菌的柴油降解菌群，其對(duì)柴油的降解率為55.9％。此外，選取了AS-3、Y-1、AY-2、Y-2、GY-2、OY-1、AS-5、PN3-2、3C-9和B-5十株細(xì)菌，構(gòu)建了組合1(AS-3、Y-1、AY-2、Y-2、GY-2、OY

6、-1、AS-5)和組合2(AS-3、Y-1、AY-2、Y-2、PN3-2、3C-9、B-5)兩個(gè)原油降解菌群，將這兩個(gè)菌群與天然富集菌群的原油降解率進(jìn)行比較，并檢測(cè)了天然富集菌群在降解不同底物時(shí)的菌群結(jié)構(gòu)變化，通過(guò)綜合分析優(yōu)化出一個(gè)含有OY-1、B-5和GY-2三株細(xì)菌的原油降解菌群。 將優(yōu)化得到的原油降解菌群應(yīng)用于戶外水池模擬石油污染的生物修復(fù)，記錄七天內(nèi)的表觀變化過(guò)程，發(fā)現(xiàn)在3天內(nèi)即表現(xiàn)出明顯的消除作用。利用GC-MS檢測(cè)七