表面等離子體激元共振及相關(guān)技術(shù)用于蛋白質(zhì)相互作用和DNA檢測(cè).pdf

1、表面等離子體激元共振(surface plasmon resonance，SPR)是一種檢測(cè)金屬表面超薄吸附層厚度和結(jié)構(gòu)變化的光學(xué)技術(shù)，是研究生物分子與其它分子相互作用的有力工具，具有高靈敏、免標(biāo)記、實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，但是傳統(tǒng)的SPR技術(shù)難以檢測(cè)小分子或者弱親和作用的反應(yīng)體系，并且它需要將探針分子固定在SPR芯片表面，固定在金膜表面探針分子尤其是生物分子的活性和識(shí)別位點(diǎn)是否受到影響值得關(guān)注，本文針對(duì)這兩方面的問題進(jìn)行了如下研究：

2、 為了提高SPR的靈敏度以滿足小分子檢測(cè)的需求，首先，從提高SPR儀器本身靈敏度方面著手，自行搭建了雙單元差分型高靈敏的SPR儀，檢測(cè)靈敏度得到了一定的提高，理想情況下可達(dá)10-5度。其次，從生物分子的組裝方法入手，探討提高SPR靈敏度的途徑。用巰基十一酸(MUA)代替羧甲基葡聚糖(CM-Dextran)在中性條件下來固定金屬金屬硫蛋白(MT)，使MT芯片對(duì)金屬離子的檢測(cè)達(dá)到了很低的水平，Cd2+的檢測(cè)下限為15ppb或0.1pM，與傳

3、統(tǒng)的離子分析技術(shù)有很好的可比性。再次，在現(xiàn)有儀器條件下，將酶催化沉淀放大技術(shù)用于SPR檢測(cè)，通過對(duì)SPR信號(hào)的放大，大大提高了SPR的靈敏度，實(shí)現(xiàn)了超痕量DNA的檢測(cè)，檢測(cè)下限可達(dá)10fM(1×10-14M)，比其它很多檢測(cè)DNA方法的檢出限都要低。 為了研究生物分子的活性是否受表面固定的影響，同時(shí)將SPR(著重研究固/液界面)和親和毛細(xì)管電泳(ACE)(溶液方法)兩種獨(dú)立的技術(shù)來研究藥物(阿魏酸，F(xiàn)A)與蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白

4、，BSA)的相互作用，提出了一個(gè)測(cè)定結(jié)合常數(shù)的新方法。SPR測(cè)定的結(jié)合常數(shù)((5.1±0.6)×104 M-1)與ACE用遷移率比得到的結(jié)果((5.6±0.4)×104M-1)十分吻合，并且與其它方法有很好的可比性。二者的比較研究表明，BSA在SPR芯片表面的固定并沒有影響它和藥物作用的活性，因此用SPR來研究固液界面親和作用是行之有效的。 最后，本論文探討不同的固定方法對(duì)蛋白質(zhì)與藥物相互活性的影響，分別采用共價(jià)偶聯(lián)、金屬螯合