珍珠黃楊遺傳多樣性研究及保護(hù)對策.pdf

1、從5個天然群體(安徽黃山市清涼峰、江西上饒市三清山、安徽安慶市天柱山、安徽安慶市鷂落坪、安徽六安市萬佛山)采集珍珠黃楊樣本，以改良CTAB法從珍珠黃楊葉片中制備模板DNA，優(yōu)化了PCR循環(huán)參數(shù)，建立了 RAPD-PCR擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系，篩選出能擴(kuò)增多態(tài)性片段較多且擴(kuò)增穩(wěn)定的21條RAPD引物，分別對162個珍珠黃楊個體的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，對珍珠黃楊群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。 篩選并建立了適合于珍珠黃楊RAPD擴(kuò)

2、增的反應(yīng)體系：反應(yīng)總體積20μL，其中30ng模板DNA，2.5mmol/LMgCl<,2>，0.5μmol/L引物，200μmol/LdNTP，1.5UTaqDNA聚合酶，2μL10×buffer。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性 5min；94℃變性40s，36℃退火30s，72℃延伸2min，循環(huán)39次；最后在72℃延伸5min。 對400條RAPD引物進(jìn)行了篩選，篩選出的21條隨機(jī)引物共擴(kuò)增檢測到209個位點(diǎn)，其中多態(tài)位點(diǎn)167

3、個，占79.9％。用POPGEN1.31版軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：Nei’s基因多樣度 (h)及Shannon 多樣性指數(shù)(I)分別為0.2946和0.4343，表明遺傳多樣性水平很高；5個群體中三清山群體(SQ)遺傳多樣性水平最高(PPB=66.03％，h=0.2390，I=0.3547)，天柱山群體次之 (PPB=63.16％、h=0.2227、I=0.3311)：對珍珠黃楊種級水平的RAPD檢測表明，每個位點(diǎn)的等位基因數(shù) (

4、A)為1.799，有效等位基因數(shù)(Ae)為1.5184，群體總遺傳多樣度(Ht)為0.2978，群體內(nèi)遺傳多樣度(Hs)為0.2197；基因分化系數(shù) (Gst)達(dá)到了0.2623，基因流(Nm)為1.4065，說明雖然珍珠黃楊大部分變異存在于群體內(nèi)，但是由于珍珠黃楊的星散狀分布受小種群效應(yīng)影響，缺乏有效的基因流，致使群體間遺傳變異占到了總變異的26.23％。 研究結(jié)果表明5個群體的相似度很高，均在0.83以上，其中天柱山群體(T

5、Z)與鷂落坪群體(YL)之間的遺傳相似最大為0.9374。鷂落坪群體(YL)與清涼峰群體(QL)之間的遺傳相似最小為0.8355。用TFPGA軟件按照Nei(1978)無偏遺傳距離計算方法進(jìn)行不加權(quán)平均聚類分析(UPGMA)，將5個珍珠黃楊天然群體分為2大類群體，即三清山群體(SQ)和清涼峰群體(QL)聚為一類，萬佛山群體(WF)、鷂落坪群體(YL)和天柱山群體(TZ)為一類。通過計算5個群體間的遺傳距離和相似性顯示群體間的遺傳距離與相

6、互間的地理距離不顯著相關(guān)。 鑒于珍珠黃楊對生境改變適應(yīng)性差和對人為干擾敏感，群落穩(wěn)定性在珍珠黃楊群體遺傳多樣性保護(hù)中的特殊地位，建議在制定珍珠黃楊遺傳多樣性保育和取樣策略應(yīng)以就地保護(hù)為主，把三清山群體(SQ)和天柱山群體(TZ)劃入自然保護(hù)區(qū)的保護(hù)范圍，對其生存空間進(jìn)行長期、有效的保護(hù)。另一方面，在群體間進(jìn)行植株和幼苗的相互移栽，以提高群體間的基因交流，最大限度保護(hù)珍珠黃楊的遺傳多樣性。遷地保育時，應(yīng)在群體內(nèi)加大取樣單株的數(shù)量。