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1、細(xì)胞是生命活動(dòng)的基本結(jié)構(gòu)單位,一切生命現(xiàn)象,包括新陳代謝、呼吸作用、光合作用、信息傳遞、跨膜運(yùn)輸?shù)壬顒?dòng)都與細(xì)胞的整體狀態(tài)息息相關(guān),一切疾病的發(fā)病機(jī)制也要以細(xì)胞病變研究為基礎(chǔ)。因此,細(xì)胞研究是生命科學(xué)中最基本、最重要的研究課題,建立發(fā)展各種原位甚至活體研究細(xì)胞的新方法和新技術(shù)勢(shì)在必行。 表面增強(qiáng)拉曼光譜(SERS)具有極高的檢測(cè)表面物種的靈敏度,能從分子水平上獲得物質(zhì)詳細(xì)的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成信息,進(jìn)而識(shí)別各類分子的“指紋”。表面
2、增強(qiáng)拉曼效應(yīng)來(lái)源于合適的納米級(jí)粗糙基底或納米粒子,SERS技術(shù)與納米粒子結(jié)合,可望從分子水平上探究細(xì)胞的復(fù)雜的生理活性,特別在活體細(xì)胞檢測(cè)方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。最近,SERS作為高靈敏的多功能的光學(xué)探針應(yīng)用于活細(xì)胞的研究開(kāi)始受到重視。但是,細(xì)胞內(nèi)組份復(fù)雜,動(dòng)態(tài)變化,細(xì)胞體系的各組分與SERS基底作用一般較弱,雜質(zhì)影響嚴(yán)重,導(dǎo)致獲取的SERS譜在重現(xiàn)性、選擇性和可行度方面皆存在不少難題,如何應(yīng)用SERS從分子水平上研究細(xì)胞的識(shí)別、分化、繁殖
3、、病變和凋亡等引起的微化學(xué)環(huán)境的變化是一個(gè)極具挑戰(zhàn)的課題。 本論文主要工作是探索將SERS應(yīng)用于細(xì)胞研究,獲得的主要成果如下: 1.利用自組裝方法制備了具有較高SERS活性的基底,通過(guò)碘取代SERS基底表面的雜質(zhì)和電化學(xué)氧化除碘方法,獲得了干凈的、均勻的、適合細(xì)胞檢測(cè)的SERS基底。 2.較系統(tǒng)地探索了幾種獲取細(xì)胞膜分子的SERS譜的方法。實(shí)驗(yàn)表明,直接利用將納米粒子和細(xì)胞一起培養(yǎng),將細(xì)胞培養(yǎng)在ITO/Au
4、基底,以及將細(xì)胞培養(yǎng)在蓋玻片上然后倒扣在SERS基底上等三種方法,皆難以獲得可信和有意義的SERS譜圖。只有將懸浮細(xì)胞滴加在干凈透明的ITO/Au基底上的方法可獲得活體CHL細(xì)胞的細(xì)胞膜的SERS光譜,通過(guò)SERS成像,初步研究了該細(xì)胞膜組成及其有關(guān)組分分布。 3.合成了能夠檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pH變化的功能納米粒子。初步結(jié)果表明,基于SERS的pH傳感Au納米粒子能用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)的某些組分的pH變化,而且有望探測(cè)pH傳感Au納米粒子進(jìn)
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