重組家蠶抗菌肽CM4抗真菌作用機(jī)理的研究.pdf

1、抗菌肽是體內(nèi)先天免疫所產(chǎn)生的小分子物質(zhì)，它們種類繁多，家族龐大，對細(xì)菌，真菌，病毒，原蟲及癌細(xì)胞等都具有抑殺能力。靈活快速是抗菌肽發(fā)揮作用的一個特點(diǎn)。 昆蟲中不含半胱氨酸的線性(Cecropin家族是最早發(fā)現(xiàn)的一類抗菌肽?？咕腃M4是由張雙全等人從中國家蠶中誘導(dǎo)獲得的線性、α-螺旋肽，已證明CM4是Cecropin家族中的一個成員。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)對抗菌肽CM4殺傷細(xì)菌及癌細(xì)胞的作用機(jī)理進(jìn)行了深入的研究，但對CM4抗真菌的機(jī)制研

2、究較少。 本論文利用畢赤酵母表達(dá)的重組家蠶抗菌肽CM4，通過一系列的細(xì)胞及分子水平的實(shí)驗(yàn)研究，試圖探索抗菌肽CM4完整的抑殺真菌的機(jī)理，挖掘抗菌肽潛在的功能，并為抗菌肽最終開發(fā)成抗菌藥物提供一定的依據(jù)。 我們通過孔穴法抗真菌實(shí)驗(yàn)，從十幾種真菌中篩選了部分對抗菌肽CM4較敏感的菌株，最終以黑曲霉和綠色木霉等作為研究對象。細(xì)胞水平上，掃描電鏡，透射電鏡和激光共聚焦觀察都顯示，抗菌肽處理的真菌外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)都發(fā)生了很大

3、的變化，出現(xiàn)了畸形，破裂，斷殘等現(xiàn)象。由于具有兩親性的α螺旋，抗菌肽CM4分子可能首先通過插入雙層脂膜而破壞了真菌的膜結(jié)構(gòu)，其次進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞器和細(xì)胞骨架造成了不同程度的損壞。 在以上工作的基礎(chǔ)上，我們又進(jìn)一步從分子水平研究了抗菌肽CM4對真菌的作用機(jī)制。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)證明，抗菌肽能與真菌的DNA和RNA結(jié)合，影響了它們在電泳中的遷移率，同時還能使核酸受到破壞，斷裂為大小不等的片斷。因而真菌細(xì)胞的代謝過程受到破壞，最終導(dǎo)致了