CBP靶向MAPK和CPSF4信號通路調(diào)控肺癌的生長.pdf

1、目的:CBP,即CREB結(jié)合蛋白(CREB-binding protein),參與許多生物進程,包括胚胎的發(fā)育生長調(diào)控以及體內(nèi)平衡等等。其定位在人的染色體16p13.3區(qū)域,與定位在22q13的P300有高度同源性。通過與許多轉(zhuǎn)錄因子相互作用,CBP能轉(zhuǎn)錄共活化并增加靶基因的表達。與此同時, CBP具有組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性,能通過介導(dǎo)組蛋白或非組蛋白的乙?；瘏⑴c基因的反式激活或抑制。CBP與P300一起,能通過基因變異,染色體易位伴隨

2、變異體富集在染色質(zhì)結(jié)構(gòu)上。CBP與許多腫瘤相關(guān),包括結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、急性骨髓白血病等。抑制CBP/P300組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性或者抑制CBP作為轉(zhuǎn)錄共活化子的活性已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)能在體內(nèi)外抑制神經(jīng)母細胞瘤、胰腺癌、急性骨髓白血病的生長。在肺癌中發(fā)現(xiàn),CBP在不同的肺癌細胞系里高表達,并且與hTERT的表達成正相關(guān)。CBP陽性表達的病人總生存期和無病生存期明顯低于CBP陰性表達的病人。盡管如此,CBP參與肺癌發(fā)生發(fā)展的具體分子機理仍不十分

3、清楚。本課題旨在通過研究闡明上述分子機理,為發(fā)展CBP作為新的肺癌治療靶點提供實驗依據(jù)。
　　方法:在本實驗中,采用免疫組化分析CBP在肺癌細胞和組織中的表達;采用MTT法檢測敲低CBP或者抑制它的乙酰轉(zhuǎn)移酶活性對人肺癌細胞A549、H1299、H322和H460細胞活力的影響;同時檢測CBP對人正常肺組織細胞HBE細胞活力的影響。通過細胞遷移實驗、細胞集落形成實驗和細胞凋亡檢測,檢測敲低CBP或者抑制其乙酰轉(zhuǎn)移酶活性對肺癌細胞生

4、物學(xué)的功能抑制作用。在分子機制研究中,運用免疫印記實驗,研究CBP對H1299細胞凋亡、遷移、增殖相關(guān)蛋白表達的影響;運用免疫熒光技術(shù),研究細胞色素C的定位及表達;運用免疫共沉淀及激光共聚焦免疫熒光技術(shù),研究CBP與CPSF4相互作用,以及表達的共定位;通過MTT、FACS、免疫印記等實驗研究CBP和CPSF4聯(lián)合作用對肺癌細胞增殖和凋亡等的影響;最后通過組織芯片染色,結(jié)合病人的預(yù)后資料,統(tǒng)計學(xué)分析CBP和CPSF4單獨或者聯(lián)合與病人性

5、別、年齡等的相關(guān)性,及與病人預(yù)后的聯(lián)系。
　　結(jié)果:(1)CBP在肺癌細胞和肺癌組織中高表達;(2)CBP敲低或活性阻斷抑制肺癌細胞的增殖和遷移;(3)CBP敲低或活性阻斷促進肺癌細胞的凋亡;(4)CBP敲低或活性阻斷下調(diào)MAPK信號通路;(5)CBP與CPSF4相互作用并且介導(dǎo)CPSF4的乙?；?(6)CBP和CPSF4協(xié)同調(diào)控hTERT的轉(zhuǎn)錄與表達;(7)CBP和CPSF4協(xié)同調(diào)控肺癌細胞的生長和凋亡;(8)CBP和CPSF4

6、的過表達與肺癌病人的不良預(yù)后呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:CBP能通過上調(diào)C-Raf/MEK/Erk和下調(diào)cytochrome C/caspase信號通路誘導(dǎo)肺癌細胞的增殖,這種誘導(dǎo)過程的發(fā)生需要CPSF4的參與。憑借CBP的富集,與CBP的相互作用,CPSF4被CBP乙酰化,協(xié)同調(diào)控下游基因,包括hTERT的轉(zhuǎn)錄并進而協(xié)同調(diào)控肺癌細胞的生長。CBP和CPSF4在肺癌組織中同時高表達,且與肺癌病人的不良預(yù)后呈正相關(guān)。綜上所述,CBP通過靶