基于《傷寒論》辛開苦降法對(duì)心梗后心室重構(gòu)大鼠的作用及機(jī)制研究.pdf

1、理論研究：
　　辛開苦降立法于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，成方完備于《傷寒論》，對(duì)后世具有深遠(yuǎn)的影響?！秱摗分行灵_苦降法具有調(diào)節(jié)開闔樞、協(xié)調(diào)臟腑等功用，廣泛運(yùn)用于寒熱錯(cuò)雜痞證、上熱下寒證、痰熱互結(jié)證、瘀熱互結(jié)證等證候之中，對(duì)后世脾胃學(xué)說及溫病學(xué)說的形成有一定的影響。
　　心梗后心室重構(gòu)是心梗發(fā)生后心室出現(xiàn)的一系列變化，應(yīng)歸屬于中醫(yī)學(xué)胸痹、心痛、心悸等范疇。中醫(yī)學(xué)對(duì)該病的認(rèn)識(shí)，病因主要有外感六淫、情志內(nèi)傷、飲食不節(jié)、年老體衰、久患他病等

2、，病機(jī)可歸結(jié)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛是指心、肺、脾、腎等臟氣血陰陽的虧損，標(biāo)實(shí)主要是指痰濁、瘀血、水濕的停聚。
　　課題組通過研究歷代文獻(xiàn)，并結(jié)合臨床觀察，認(rèn)為隨著人們生活方式、飲食、體質(zhì)等的變化，熱邪在該類疾病中的影響越來越突出。因此提出了瘀熱相互膠結(jié)、相互促進(jìn)使病情不斷演變發(fā)展的觀點(diǎn)，并總結(jié)出以《傷寒論》辛開苦降法為主治療該類疾病的思路。以辛開苦降法為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代的藥理研究，擬定了宣痹散結(jié)方，其具有活血化瘀、清熱散結(jié)之功。在多年的臨

3、床運(yùn)用和臨床研究中已顯示出卓越的療效。
　　心室重構(gòu)的現(xiàn)代機(jī)制研究主要有血流動(dòng)力學(xué)改變、神經(jīng)內(nèi)分泌的激活、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、心肌纖維化等。
　　實(shí)驗(yàn)研究：
　　目的：
　　本課題主要研究基于《傷寒論》辛開苦降法組方的宣痹散結(jié)方對(duì)心梗后心室重構(gòu)瘀熱證大鼠的防治作用與機(jī)制，并為目前正在作為新藥開發(fā)的該方提供實(shí)驗(yàn)研究支持。
　　方法：
　　1.宣痹散結(jié)方對(duì)大鼠疾病和證候的干預(yù)研究。對(duì)Wistar大鼠采用結(jié)

4、扎冠狀動(dòng)脈前降支的方法建立急性心肌梗死模型，存活大鼠喂養(yǎng)4周后即可出現(xiàn)明顯的心室重構(gòu)，對(duì)模型B組和宣痹散結(jié)方B組兩組大鼠再以角叉菜膠和活性干酵母制作瘀熱模型。對(duì)心室重構(gòu)的研究主要通過心功能、心臟指數(shù)、形態(tài)學(xué)等參數(shù)來觀察。對(duì)瘀熱證的觀察主要選用心率、體溫、血常規(guī)、血清中炎癥因子表達(dá)水平、血流變等指標(biāo)。
　　2.宣痹散結(jié)方對(duì)血清中炎癥因子的干預(yù)研究。運(yùn)用ELISA法檢測(cè)心梗后心室重構(gòu)模型大鼠血清中IL-6、IL-10、TNF-α等炎癥

5、因子的表達(dá)水平，以揭示其對(duì)大鼠心梗后心室重構(gòu)的作用機(jī)制。
　　3.宣痹散結(jié)方對(duì)大鼠血清中與纖維化相關(guān)因子的干預(yù)研究。運(yùn)用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、HYP等與纖維化相關(guān)因子的表達(dá)水平。
　　4.宣痹散結(jié)方對(duì)心梗后心室重構(gòu)蛋白表達(dá)的干預(yù)研究。運(yùn)用Western blotting法測(cè)定各組大鼠心肌組織中COL1、 P-smad3、smad7等蛋白的表達(dá)。
　　5.宣痹散結(jié)方對(duì)心梗后

6、心室重構(gòu)mRNA表達(dá)的干預(yù)研究。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析法檢測(cè)各組大鼠心肌組織中NF-κB、smad3、smad7、TGF-β1等因子mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　對(duì)心室重構(gòu)的影響：①心功能：同模型A組比較，宣痹散結(jié)方A組可明顯提高大鼠心臟射血分?jǐn)?shù)、但對(duì)心室腔無明顯干預(yù)作用；同模型A組比較，卡托普利可減小舒張期和收縮期的心室腔內(nèi)徑，但對(duì)心室射血分?jǐn)?shù)無改善作用。②光鏡和電鏡顯示：模型A組心肌可見明顯壞死灶，心肌細(xì)胞腫脹，

7、炎性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌線粒體腫脹?？ㄍ衅绽托陨⒔Y(jié)方能夠減輕心肌細(xì)胞腫脹，減輕炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，改善心肌線粒體病理變化。③通過Masson染色觀察發(fā)現(xiàn)卡托普利和宣痹散結(jié)方能顯著減輕心室重構(gòu)后心肌纖維化程度。
　　對(duì)證候的影響：①心率：同模型A組比較，模型B組心率顯著加快，同模型B組比較，宣痹散結(jié)方B組心率顯著降低。②體溫：同模型A組相比，模型B組大鼠在注射活性干酵母后6小時(shí)體溫明顯升高，9小時(shí)最明顯；同模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組大鼠

8、體溫降低顯著。③血常規(guī)：同模型A組比較，模型B組大鼠的血紅蛋白濃度明顯升高，與模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組大鼠的紅細(xì)胞壓積明顯降低。④血流變：同模型A組相比，模型B組大鼠全血黏度中、高切升高顯著，同模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組大鼠的全血黏度低切、中切、紅細(xì)胞壓積明顯降低。⑤血清中炎癥因子:同模型A組比較,模型B組大鼠血清中IL-6、TNF-α的表達(dá)顯著升高，與模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組的IL-10表達(dá)明顯升高。
　　作用機(jī)制研究

9、：①宣痹散結(jié)方對(duì)心梗后心室重構(gòu)大鼠血清中炎癥因子IL-6、TNF-α的病理性表達(dá)上調(diào)具有抑制作用，而對(duì)IL-10的表達(dá)具有促生作用。②對(duì)TGF-β1、MMP-9的表達(dá)有抑制作用，而對(duì)TIMP-1有促生作用。③對(duì)COL1、P-smad3蛋白表達(dá)有下調(diào)作用，對(duì)smad7蛋白表達(dá)具有上調(diào)作用。④對(duì)NF-κBmRNA、TGF-β1mRNA、smad3mRNA的表達(dá)有下調(diào)作用，對(duì)smad7mRNA有上調(diào)作用。
　　結(jié)論：
　　1.以《

10、傷寒論》辛開苦降法為基礎(chǔ)的宣痹散結(jié)方對(duì)心梗后心室重構(gòu)大鼠的心室重構(gòu)和瘀熱證均能有效地治療和改善。
　　2.宣痹散結(jié)方對(duì)NF-kB、IL-6、TNF-α等促使心室重構(gòu)的炎癥因子有下調(diào)和抑制作用，而對(duì)炎癥抑制因子IL-10有促生作用，提示其可通過抑制NF-kB所介導(dǎo)的IL-6等炎癥因子所誘發(fā)的免疫炎性反應(yīng),從而對(duì)心室重構(gòu)和瘀熱證起到防治作用。
　　3.宣痹散結(jié)方對(duì)TGF-β1、MMP-9、COL1、smad3、P-smad3等促

11、使心室重構(gòu)的纖維化因子有下調(diào)和抑制作用，而對(duì)抑制纖維化的因子TIMP-1、smad7有促生作用，提示宣痹散結(jié)方可作用于TGFβ1-smad通路，從而發(fā)揮其抗心室重構(gòu)的作用。
　　4.宣痹散結(jié)方，可作用于NF-kB通路以消除心室重構(gòu)過程中的免疫炎性反應(yīng)，并作用于TGFβ1- Smad通路以減輕心肌纖維化，同時(shí)對(duì)心室重構(gòu)中的瘀熱證候亦具有顯著的改善作用，提示心室重構(gòu)中的NF-kB、TGFβ1- Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化與瘀熱證的病機(jī)