抑癌基因PCDH20在人乳腺癌中的生物學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　本究通過(guò)檢測(cè)PCDH20（Protocadherin20）在人乳腺癌細(xì)胞株、乳腺癌組織及其癌旁組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合乳腺癌臨床和病理學(xué)特征的分析探討其臨床意義；通過(guò)在人乳腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá) PCDH20，觀察其對(duì)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響，并深入探討其發(fā)揮生物學(xué)功能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.利用逆轉(zhuǎn)錄PCR及實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別檢測(cè)基因PCDH20在人乳腺癌細(xì)胞株（BT549、MDA-

2、MB-231、MDA-MB468、MCF-7、SK-BR-3、T47D、YYC-B1、YYC-B3、ZR-75-1）和人乳腺癌、癌旁組織及正常乳腺組織中的mRNA表達(dá)水平，并分析其與臨床資料及病理特征的相關(guān)性；
　　2.分別通過(guò)通過(guò)免疫熒光觀察PCDH20蛋白在細(xì)胞中的定位，通過(guò)免疫組化觀察其在乳腺組織中的定位；
　　3.通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（CCK-8和 transwell實(shí)驗(yàn)）觀察 PCDH20基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞增殖、遷移、

3、侵襲能力的影響，研究PCDH20在人乳腺癌細(xì)胞株中的生物學(xué)功能；
　　4.通過(guò)Western blot在過(guò)表達(dá)PCDH20和非過(guò)表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株中對(duì)Smad2、Phospho-Smad2、Smad3、Phospho-Smad3、E-cadherin、MMP9進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1. PCDH20在MCF-7、YCC-B1乳腺癌細(xì)胞株中表達(dá)缺失，而在MDA-MB-468和ZR-75-1中表達(dá)降低；PCDH20在乳

4、腺癌組織中較癌旁組織及正常乳腺癌組織表達(dá)下調(diào)，其在正常乳腺組織與癌旁組織中的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，通過(guò)進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)PCDH20的表達(dá)水平與各臨床及病理特征無(wú)明顯相關(guān)；
　　2.免疫熒光和免疫組化實(shí)驗(yàn)表明PCDH20蛋白分別定位于細(xì)胞膜和乳腺組織中乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞；
　　3.在MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞株中過(guò)表達(dá)PCDH20的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，其增殖能力未受到抑制；
　　4.在MCF-7和MDA-MB

5、-468中，分別過(guò)表達(dá)PCDH20后的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞較對(duì)照組細(xì)胞穿過(guò) transwell小室的數(shù)目分別降低53.8％（p<0.001）和55.1%（p<0.001）；
　　5. MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞株過(guò)表達(dá)PCDH20后，其侵襲能力減弱，穿過(guò)鋪有基質(zhì)膠的小室的細(xì)胞數(shù)目減少43.7%（p<0.001）；
　　6. western blot實(shí)驗(yàn)顯示，在過(guò)表達(dá) PCDH20的 MCF-7和MDA-MB-468中，Phosph

6、o-Smad2、Phospho-Smad3、MMP9的表達(dá)水平下降，而E-cadherin的表達(dá)水平升高；
　　結(jié)論：
　　1. PCDH20在乳腺癌細(xì)胞 MCF-7、MDA-MB-468、ZR-75-1和YCC-B1中表達(dá)缺失或降低;
　　2. PCDH20在乳腺癌組織中較癌旁組織和正常乳腺組織中表達(dá)水平降低（p<0.001），統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，PCDH20的表達(dá)水平與臨床資料及病理特征無(wú)明顯相關(guān)性；
　　4.