Gm-CSF對(duì)子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響及子宮結(jié)合帶干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn).pdf

1、目的:
　　1.使用無(wú)血清培養(yǎng)基體外分離擴(kuò)增子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞，研究其生物學(xué)特性。
　　2.判斷粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子對(duì)子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響。
　　3.建立子宮結(jié)合帶干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定方法。
　　方法:
　　1.比較在無(wú)血清培養(yǎng)基中和含10％的胎牛血清培養(yǎng)基中子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞表型、增殖能力、細(xì)胞活率和分化能力等生物學(xué)特性。
　　2.將術(shù)中取得的子宮內(nèi)膜用胰酶和膠原酶

2、Ⅰ進(jìn)行消化、培養(yǎng)、擴(kuò)增。將細(xì)胞培養(yǎng)至第三代后，分別將細(xì)胞經(jīng)不同濃度的GM-CSF(0ng/ml，1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml)培養(yǎng)，采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀進(jìn)行袁型分析、活率判斷、周期分析，通過(guò)CCK-8判斷其生物學(xué)生長(zhǎng)特性，并在體外誘導(dǎo)其成脂、成骨、成軟骨分化。將子宮結(jié)合帶進(jìn)行分離、培養(yǎng)、鑒定。
　　3.將手術(shù)中無(wú)菌取得的子宮內(nèi)肌層即子宮結(jié)合帶用胰酶和膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化、培養(yǎng)、擴(kuò)增。采用倒置顯微鏡觀

3、察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀進(jìn)行表型分析及存活率判斷，CCK-8法判斷其生長(zhǎng)特性，并在體外誘導(dǎo)其成脂、成骨、威軟骨分化。
　　結(jié)果:
　　第一部分:
　　1.無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞和有血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)相似，但是前者呈明顯的漩渦狀生長(zhǎng)，更加細(xì)長(zhǎng)，立體感更強(qiáng)。
　　2.無(wú)血清和有血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物均呈陽(yáng)性。
　　3.無(wú)血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞活率更高;

4、細(xì)胞增殖能力更強(qiáng)。
　　第二部分:
　　1.從EnMSCs的生長(zhǎng)密度來(lái)看，隨著GM-CSF濃度升高，接種同等密度的EnMSCs在接種24h和48h細(xì)胞密度差異不大，但是96h時(shí)不同濃度的GM-CSF下培養(yǎng)的EnMSCs細(xì)融合度產(chǎn)生了明顯差異。
　　2.從EnMSCs活率來(lái)看隨著GM-CSF濃度升高，EnMSCs活率呈上升趨勢(shì)，在濃度為10ng/ml時(shí)，EnMSCs活率最高，但是差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.自En

5、MSCs培養(yǎng)第3d開(kāi)始，不同濃度的GM-CSF對(duì)EnMSCs的增殖產(chǎn)生了不同的變化，且有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　第三部分:
　　1.所獲細(xì)胞傳代后能迅速貼壁，呈長(zhǎng)梭形;流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，表面標(biāo)志物CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD13、CD166、HLA-ABC呈陽(yáng)性表達(dá)，而CD34、CD45、CD14、HLA-DR、CD19呈陰性表達(dá)。
　　2.CCK-8生長(zhǎng)曲線呈S形。
　　3.誘