miRNA122和miRNA199基因單核苷酸多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌易感性及預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、近年研究表明，miRNA相關(guān)SNPs可通過(guò)影響miRNA的成熟過(guò)程、表達(dá)水平及與靶基因的識(shí)別及結(jié)合等，使miRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)生異常，從而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后。miRNA相關(guān)SNPs主要包括miRNA自身基因SNPs、生物合成通路相關(guān)基因SNPs及miRNA靶基因中的SNPs。而由于成熟miRNA的分子長(zhǎng)度較短，所以位于自身基因中的SNPs極可能影響該miRNA分子的成熟過(guò)程及下游功能，一系列基因組關(guān)聯(lián)研究及體外實(shí)驗(yàn)的證實(shí)了這一假設(shè)

2、。鑒于miRNA-122和miRNA-199在肝細(xì)胞肝癌過(guò)程中的作用，因此，推測(cè)位于miRNA-122和miRNA-199自身基因SNPs可能通過(guò)影響相應(yīng)miRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從而影響肝細(xì)胞肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、臨床特征及預(yù)后。本研究將分兩部分，第一部分采用病例對(duì)照研究方法探討miRNA-122和miRNA-199基因SNPs與肝細(xì)胞肝癌遺傳易感性的關(guān)系，第二部分收集肝細(xì)胞肝癌病例相關(guān)臨床資料，并對(duì)肝癌根治術(shù)病例進(jìn)行隨訪研究，探討miRNA-1

3、22和miRNA-199基因SNPs與肝細(xì)胞肝癌臨床特征及肝癌根治術(shù)后預(yù)后的關(guān)系。
　　第一部分 miRNA-122和miRNA-199基因單核苷酸多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究
　　目的：
　　探討miRNA-122 rs9966765、rs1135519、rs17669及miRNA-199rs74723057和rs12120556，5個(gè)位點(diǎn)SNPs與廣西地區(qū)人群肝細(xì)胞肝癌遺傳易感性的關(guān)系。并分析上述多態(tài)位點(diǎn)

4、基因與基因、基因與環(huán)境因素的交互作用在肝細(xì)胞肝癌易感性中的作用。
　　方法：
　　(1)本研究采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的較大樣本病例-對(duì)照研究設(shè)計(jì)方法。所有研究對(duì)象均為從2007年6月到2011年6月，來(lái)自廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、附屬腫瘤醫(yī)院和廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院同意參與調(diào)查、經(jīng)組織學(xué)病理確診，未接受化療和放射治療的原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌新發(fā)病例，共收集1050例;對(duì)照組選自同期住院的脊柱骨科、創(chuàng)傷外科、美容整形外科及眼科的非腫瘤患

5、者，按年齡、性別匹配，共收集對(duì)照組1079例。采用調(diào)查問(wèn)卷收集研究對(duì)象的基本情況、既往史、個(gè)人史、家族史、飲酒史和吸煙史等。采集研究對(duì)象外周血2 ml，采用Sequenom MassArray基因分型系統(tǒng)對(duì)候選的5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行因分型檢測(cè)。
　　(2)miRNA-122、miRNA-199基因SNPs的選擇利用dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)，按照預(yù)先設(shè)定的頻率標(biāo)準(zhǔn)篩選上述SNPs。本研究設(shè)定的頻率標(biāo)準(zhǔn)是:候選SNPs最小等位基因頻率(MAF)為

6、0.05且各SNPs之間LD(r2)小于0.8。
　　(3)采用卡方檢驗(yàn)比較病例組和對(duì)照組一般人口學(xué)資料。采用非條件Logistic回歸比較各基因型在肝細(xì)胞肝癌患者和對(duì)照組之間分布頻率的差異。采用多因素Logistic回歸分析基因-基因及基因-環(huán)境的交互作用。
　　結(jié)果：
　　(1)miRNA-122基因rs1135519位點(diǎn)野生純合子TT在病例和對(duì)照組中的分布頻率分別為68.65％、73.14％，突變雜合子TC在兩組

7、中的分布頻率分別為28.37％、25.09％，突變純合子CC在兩組的分布頻率分別為2.98％、1.77％，經(jīng)卡方檢驗(yàn)TT、TC、CC三種基因型在病例和對(duì)照組中的分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.022)。調(diào)整年齡、性別、吸煙、飲酒以及HBV感染等影響因素，攜帶突變基因型CC可顯著增加肝細(xì)胞肝癌患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.708，95％CI:1.154-6.356)。但是未發(fā)現(xiàn)miRNA-122基因rs9966765、rs17669和miRNA-199

8、基因rs74723057、rs12120556多態(tài)性位點(diǎn)與肝細(xì)胞肝癌患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
　　(2)分層分析結(jié)果顯示，miRNA-122基因rs9966765 GC/CC、rs1135519 TC/CC位點(diǎn)基因型可增加較大年紀(jì)（＞47歲，平均年齡）個(gè)體罹患肝細(xì)胞肝癌的風(fēng)險(xiǎn)(調(diào)整OR=1.565，95％CI:1.063-2.303; OR=1.534，95％CI:1.043-2.257);miRNA-122基因rs17669位點(diǎn)AG/GG

9、基因型可增加較大年紀(jì)（＞47歲，平均年齡）個(gè)體罹患肝細(xì)胞肝癌的風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.482，95％CI:1.003-2.192)，并且可增加女性肝細(xì)胞肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.240，95％CI:1.035-4.484)。
　　(3)基因-環(huán)境因素交互作用分析結(jié)果顯示，miRNA-122 rs17669位點(diǎn)AG基因型與飲酒在肝細(xì)胞肝癌發(fā)病中存在交互作用(P=0.045);合并AG/GG基因型發(fā)現(xiàn)，G等位基因與飲酒在肝細(xì)胞肝癌發(fā)病過(guò)程中存

10、在顯著交互作用(P=0.044)，但是未發(fā)現(xiàn)miRNA-122rs9966765、rs1135519和miRNA-199基因rs74723057、rs12120556位點(diǎn)多態(tài)性與飲酒存在交互作用。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明，miRNA-122基因SNPs可能影響肝細(xì)胞肝癌遺傳易感性，rs1135519位點(diǎn)多態(tài)性可能是廣西地區(qū)人群肝細(xì)胞肝癌獨(dú)立危險(xiǎn)因素，rs17669位點(diǎn)多態(tài)性與飲酒交互作用影響肝細(xì)胞肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

11、>　　第二部分 miRNA-122和miRNA-199基因單核苷酸多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌臨床特征及肝癌根治術(shù)后預(yù)后的關(guān)系
　　目的：
　　探討廣西地區(qū)人群miRNA-122基因rs9966765、rs1135519、rs17669和miRNA-199基因rs74723057、rs12120556五個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)SNPs與肝細(xì)胞肝癌臨床特征及肝癌根治術(shù)后整體生存及無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間的關(guān)系，為肝細(xì)胞肝癌的預(yù)后評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。
　　

12、方法：
　　收集2007年2月至2009年2月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院就診和治療的肝細(xì)胞肝癌新發(fā)病例276例，包括接受根治性切除術(shù)或非手術(shù)治療的肝細(xì)胞肝癌患者。通過(guò)查閱住院病歷詳細(xì)記錄患者的一般情況、確診時(shí)間、治療方式、影像學(xué)檢查結(jié)果等臨床特征數(shù)據(jù)及AFP水平、總膽紅素及白蛋白等實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。并對(duì)納入本研究的接受肝癌根治術(shù)后的肝細(xì)胞肝癌確診病例進(jìn)行電話隨訪，收集并詳細(xì)記錄患者存活、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡情況

13、等情況，共收集到資料完整病例179例。采用Sequenom MassArray技術(shù)對(duì)上述候選位點(diǎn)進(jìn)行基因分型檢測(cè)，應(yīng)用EpiData3.0對(duì)所有資料進(jìn)行雙錄入和一致性檢查，并運(yùn)用SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以卡方檢驗(yàn)或確切概率法比較各基因型分布頻率與肝細(xì)胞肝癌臨床特征的關(guān)系，用乘積極限法(Kaplan-Meier-method)繪制生存曲線，對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)(Log-rank test)比較上述位點(diǎn)不同基因型攜帶者無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間、總

14、生存時(shí)間的差異，多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析位于miRNA-122和miRNA-199基因上五個(gè)SNPs與肝細(xì)胞肝癌臨床特征及肝癌根治術(shù)后整體生存及無(wú)復(fù)發(fā)生存的關(guān)系。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　(1) miRNA-122和miRNA-199基因5個(gè)SNPs各位點(diǎn)基因型與肝細(xì)胞肝癌患者臨床特征，包括大體分型、腫瘤直徑大小、腫瘤位置、腫瘤個(gè)數(shù)、術(shù)前肝硬化、門(mén)脈癌栓、脈管侵犯情況、被膜

15、侵犯以及血清中AFP、總膽紅素、白蛋白水平等均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(2)K-M單因素分析結(jié)果顯示，miRNA-122和miRNA-199基因5個(gè)SNPs各位點(diǎn)基因型與肝細(xì)胞肝癌患者總生存時(shí)間和無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P＞0.05)。
　　(3)校正年齡性別吸煙飲酒和HBV感染因素的Cox回歸分析結(jié)果顯示，miRNA-122基因rs1135519位點(diǎn)CC基因型與肝細(xì)胞癌根治術(shù)后總體生存時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，但

16、是可延長(zhǎng)肝癌根治術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間(校正HR=0.192,95％CI0.043-0.858)。
　　結(jié)論：
　　miRNA-122基因rs9966765、rs1135519、rs17669和miRNA-199基因rs74723057、rs12120556五個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)基因多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌臨床特征無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，miRNA-122基因rs1135519位點(diǎn)基因多態(tài)性可影響肝癌根治術(shù)后總體生存時(shí)間，而miRNA-199基因rs7