樹突狀細胞生長激素受體的檢測.pdf

1、研究背景:
　　惡性腫瘤是威脅全球人類健康的頭號殺手，傳統(tǒng)治療手段如手術(shù)、放療、化療雖有進展，但癌癥患者的預后仍不能令人滿意，發(fā)展新的治療方式及策略迫在眉睫。過繼性免疫治療采集外周血、臍血或骨髓中的單個核細胞，對其進行培養(yǎng)、擴增及誘導，回輸或轉(zhuǎn)輸回患者，起到有效抑制腫瘤細胞生長的作用，達到預防、控制腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的目的。近年來，對于腫瘤組織中樹突狀細胞的浸潤程度與腫瘤轉(zhuǎn)移及臨床預后關(guān)系的報道日益增多。
　　目前樹突狀細胞（d

2、endritic cells，DCs）被認為是專職抗原提呈細胞（antigen presenting cell，APC）中功能最強的，能夠高效的激活初始型T細胞，引起免疫耐受和免疫激活，在機體免疫系統(tǒng)中不可或缺。但是機體內(nèi)DC細胞群的存在很少，對于臨床治療與科研的需求不能達到滿意。伴隨著DC基礎(chǔ)性研究的深入進展，對DC的體外誘導培養(yǎng)技術(shù)也獲得了很大的進步。對單核細胞應用白細胞介素-4（ interleukin-4， IL-4）和粒細胞-

3、巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF）共同刺激獲取細胞群組，這一時期的DC處于未成熟狀態(tài)，而再加入CD40L、炎癥因子、IL-1等刺激信號后，就能誘導DC分化成熟，并且具有不同的功能表型。
　　生長激素(growth hormone，GH)是一種大分子蛋白質(zhì)，能促進機體的生長發(fā)育、新陳代謝等過程。由于細胞膜的濾過作用，GH往往不能直接穿

4、透作用于細胞。細胞膜表面存在有生長激素受體(growth hormone receptor，GHR)，GH要發(fā)揮生物活性就要與其結(jié)合，形成小分子聚合物透過細胞膜，通過其他信號分子的刺激表達GH的生物活性，并極高效的形成酶聯(lián)催化效應。
　　目的:
　　體外應用 IL-4及 GM-CSF聯(lián)合誘導培養(yǎng)人臍血來源樹突狀細胞，并應用熒光定量PCR、western-blot、免疫熒光及免疫組化檢測生長激素受體的表達，并探討其臨床意義。<

5、br>　　方法:
　　嚴格遵循無菌操作，將10組人臍帶血采用淋巴細胞分離液離心，獲得臍血單核細胞，應用白細胞介素-4（IL-4）和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（Granulocyte macrophage colony stimulating factor GM-CSF）誘導刺激單核細胞，獲得樹突狀細胞。設計將提取淋巴細胞后，誘導表達前淋巴細胞為對照組，誘導表達后為樹突狀細胞組，進行免疫熒光，免疫組化，熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印記法

6、檢測生長激素受體表達量，并進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:
　　臍血單核細胞在終濃度為5ng/ml的IL-4及10ng/ml的GM-CSF誘導下分化為成熟DCs。鏡下觀察熒光免疫及免疫組化染色的DC，其細胞核染色加深，陽性率高；DCGHR基因和內(nèi)參基因的qRT-PCR中mRNA的相對表達量分別為75.3和24.7（P＜0.05）；Western結(jié)果示：與誘導前相比，誘導后的GHR蛋白表達相對灰度值增高，分別為0.2047±0.02