NP、BPA和B[a]P聯(lián)合暴露對斑馬魚（Danio rerio）體內(nèi)雌激素-抗雌激素效應(yīng)的研究.pdf

1、環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(EDCs)廣泛存在于生活和工作的環(huán)境中，并可通過食物鏈進入動物和人體內(nèi)，干擾機體正常內(nèi)分泌系統(tǒng)功能。目前，對單一化合物的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)已有比較詳細的研究，主要造成生殖障礙、出生缺陷、發(fā)育異常、代謝紊亂以及癌癥發(fā)生等不良影響。但是野外環(huán)境是非常復(fù)雜的，往往存在多種EDCs共同作用，與此相關(guān)的報道還很少，據(jù)僅有的少量資料可以發(fā)現(xiàn)，兩種或多種化合物的聯(lián)合效應(yīng)并不是各個污染物作用的簡單相加，值得我們深入研究。然而，在EDCs作

2、用機理方面的研究還很有限，各實驗室的結(jié)果時常出現(xiàn)矛盾，無法以現(xiàn)有的的理論來解釋。近年來，許多研究者逐漸開始關(guān)注AhR-ERα交叉作用在水生動物體內(nèi)EDCs效應(yīng)中發(fā)揮的作用，眾所周知ERα是體內(nèi)介導(dǎo)雌激素效應(yīng)的重要受體，其表達受到內(nèi)源或外源化合物影響，而細胞色素P450系統(tǒng)中的CYPIA與大多數(shù)環(huán)境污染物的代謝有關(guān)，且受到AhR的調(diào)控。由此，我們猜想AhR-ERα途徑可能在環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的聯(lián)合效應(yīng)中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。 本研究

3、用壬基酚(NP)、雙酚A(BPA)、苯并[α]芘和雌二醇(E2)多種內(nèi)分泌干擾物對斑馬魚進行聯(lián)合暴露，檢測暴露后AhR-ERα相關(guān)基因的表達差異，試圖通過AhR-ERα交叉作用途徑來探討EDCs的雌激素效應(yīng)或抗雌激素效應(yīng)的機制。通過NP和BPA聯(lián)合暴露斑馬魚來研究環(huán)境類雌激素的聯(lián)合效應(yīng)。將成年雄性斑馬魚置于NP(62.5和125μg/L)和BPA(250、500和1000μg/L)半靜態(tài)系統(tǒng)中，聯(lián)合暴露14d。從實驗結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，NP和

4、BPA的聯(lián)合雌激素效應(yīng)是通過誘導(dǎo)ERα來介導(dǎo)Vtg表達的，這種表達隨NP和BPA濃度的升高而上調(diào)，有顯著的濃度-效應(yīng)關(guān)系。NP與低濃度(250μg/L)BPA和中濃度(500μg/L)BPA聯(lián)合暴露能誘導(dǎo)ERα mRNA上調(diào)2.5至5.7倍，遠大于單獨暴露的效應(yīng)之和，呈現(xiàn)明顯的協(xié)同效應(yīng)。同樣，聯(lián)合暴露使Vtg隨ERα mRNA表達量急劇上升，協(xié)同效應(yīng)也極顯著。然而，NP和BPA聯(lián)合暴露劑量與AhR或CYPlA表達量之間沒有明顯的相關(guān)性。

5、這些結(jié)果提示，NP和BPA共同作用于ERα，在低濃度時相互促進與ERα結(jié)合，表現(xiàn)為相加效應(yīng)。另外，從我們的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，NP和BPA并不是通過CYPlA進行代謝的。為了解B[a]P的抗雌激素效應(yīng)，我們將性成熟雌性斑馬魚暴露于不同濃度B[a]P中研究其與內(nèi)源雌激素的聯(lián)合作用，同時將成體雄性斑馬魚暴露于B[a]P和E2混合的水體中研究它與外源雌激素的聯(lián)合效應(yīng)機制。首先，當B[a]P暴露濃度在10～50μg/L，范圍內(nèi)，性成熟雌性斑馬魚肝臟中ER

6、α和Vtg表達量急劇下降：暴露濃度>50μg/L時，ERα mRNA表達量維持在一定水平，不再隨B[a]P濃度提高而下調(diào)，Vtg反而緩慢回升。同時，檢測到AhR mRNA表達量顯著上升，100μg/L暴露組誘導(dǎo)的表達量最高，然后回落。低劑量(10～20μg/L)B[a]P對CYPlA表達量影響不明顯，但是高劑量組(100和200μg/L)誘導(dǎo)CYPlA表達量顯著增加。這些結(jié)果提示，低劑量B[a]P激活A(yù)hR介導(dǎo)的對內(nèi)源E2(誘導(dǎo)ERα介

7、導(dǎo)的雌激素效應(yīng))的代謝作用，而高劑量B[a]P卻抑制了這種作用。隨后，我們在E2和B[a]P對雄性斑馬魚進行聯(lián)合暴露時發(fā)現(xiàn)，在較低E2濃度(250ng/L)條件下，B[a]P也能誘導(dǎo)AhR和CYPlAmRNA上調(diào)，并抑制ERα和Vtg mRNA表達，也呈濃度-效應(yīng)關(guān)系；然而，高濃度E2(500ng/L)與B[a]P聯(lián)合作用于雄性斑馬魚時，E2反而對AhR有抑制作用，AhR和CYPlAmRNA急劇下降，且EROD酶活性也迅速降低。這些結(jié)果