LSINCT5在上皮性卵巢癌中的表達及抑制其表達的體外研究.pdf

1、背景：
　　卵巢癌(ovarian cancer)是女性常見的惡性腫瘤之一，致死率在所有惡性腫瘤中居于首位。卵巢位于盆腔的深部，卵巢癌早期病變很難被發(fā)現(xiàn)，而且缺乏有效的治療手段。隨著診療技術不斷提高和新化療藥物的臨床應用，卵巢癌患者的預后已經得到了極大改善。但是由于多數(shù)卵巢癌患者在行根治性手術前已經出現(xiàn)了微轉移，總體生存率并沒有得到顯著的提高。
　　近幾年，在分子生物學技術不斷發(fā)展的基礎上，腫瘤學主要集中在基因靶向分子治療方

2、面的研究。采用化學合成、慢病毒載體或是質粒載體等方法將相關靶基因的干擾片段轉入到需要研究的細胞中，干擾靶基因的表達，通過檢測干擾后靶基因表達水平的變化和細胞生物學行為的改變，初步研究靶基因在相應細胞增殖和分化中的作用。
　　長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA，LncRNA）是一類不能為蛋白質編碼的RNA。已有越來越多的研究顯示LncRNA能夠在染色質修飾、轉錄或轉錄后等水平調控下游基因的表達，進而參與細胞增殖

3、、凋亡及侵襲等多種生物學過程并與腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展相關。但是LncRNA與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的研究尚還處于起步階段。本研究基于國外關于長鏈非編碼基因芯片研究結果，選取在卵巢癌呈差異表達的應激誘導長非編碼轉錄本5(Long stress-induced non-coding transcript5，LSINCT5)做為研究對象，采用實時熒光定量PCR技術檢測LSINCT5在上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，E

4、OC）和正常卵巢組織的表達情況，并分析其與卵巢癌臨床病理指征的關系。通過小片段RNA(siRNA)干擾技術，靶向沉默卵巢癌SKOV3細胞株中LSINCT5基因的表達，初步探討LSINCT5對卵巢癌細胞生物學行為的影響。
　　目的：
　　第一部分研究長鏈非編碼基因LSINCT5在上皮性卵巢癌組織中的表達水平，并分析其表達與臨床病理特征的相關性；第二部分主要是將化學合成siRNA干擾片段瞬時轉染卵巢癌SKOV3細胞，初步探討長鏈

5、非編碼基因LSINCT5對卵巢癌細胞生物學行為的影響。
　　方法：
　　1、采用實時熒光定量PCR方法檢測長鏈非編碼基因LSINCT5在上皮性卵巢癌組織和正常卵巢組織標本中的表達情況，并分析其表達水平與卵巢癌患者的臨床分期、病理分級等臨床病理特征的關系。
　　2、設計針對目的基因LSINCT5的LSINCT5-SiRNA片段，通過瞬時轉染的方法，將其轉入到卵巢癌SKOV3細胞中，沉默靶基因的表達。
　　3、采用C

6、CK8試劑盒、Transwell小室等檢測轉染LSINCT5-SiRNA后卵巢癌SKOV3細胞的增殖、侵襲和遷移等生物學行為的改變。
　　結果：
　　1、上皮性卵巢癌組織中LSINCT5 mRNA的表達量明顯高于正常卵巢組織中LSINCT5 mRNA的表達量[(25.75±47.31) vs.(3.78±6.65)]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2、上皮性卵巢癌組織中Ⅲ、Ⅳ期LSINCT5 mRNA的表達量

7、明顯高于Ⅰ、Ⅱ期LSINCT5 mRNA的表達量[(36.96±56.86) vs.(6.39±4.57)]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3、上皮性卵巢癌組織中中低分化、低分化及未分化組LSINCT5 mRNA的表達量明顯高于高分化組[(29.73±51.01) vs.(5.89±4.70)],差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4、上皮性卵巢癌組織中發(fā)生大網膜或淋巴組織轉移組LSINCT5 mRNA的表達量

8、明顯高于未發(fā)生組[（46.35±60.90）vs.（5.16±4.44）]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　5、轉染卵巢癌SKOV3細胞48小時以后，干擾組中LSINCT5 mRNA的表達水平較陰性對照組明顯下調（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義。
　　6、轉染卵巢癌SKOV3細胞48小時以后，細胞的遷移和侵襲的能力出現(xiàn)明顯降低（P<0.05），差異具有統(tǒng)計學意義。
　　7、轉染卵巢癌SKOV3細胞48小時以后

9、，24、48小時細胞的增殖能力較陰性對照組下降（P<0.05），72小時細胞增殖能力下降不明顯（P>0.05）。
　　結論：
　　1、LSINCT5在上皮性卵巢癌組織中陽性表達，且表達水平與患者的臨床分期、病理分級以及有無轉移密切相關，提示LSINCT5在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要的作用。
　　2、瞬時轉染LSINCT5-siRNA靶向沉默LSINCT5的表達后，卵巢癌SKOV3細胞的侵襲和遷移能力下降；2