脂肪酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性與非酒精性脂肪性肝病及其血清脂肪酸變化的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，與胰島素抵抗(insulin resistance,IR)和遺傳易感密切相關(guān)。由于尚無有效的治療方法，NAFLD主要以預(yù)防為主。因此，研究NAFLD的易感基因，預(yù)測個體NAFLD發(fā)病風(fēng)險，指導(dǎo)高危人群制定合理的膳食對NAFLD的預(yù)防具有重要意義。

2、r>　　脂肪酸在NAFLD的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，不同種類的脂肪酸具有不同的生理功能，對肝細(xì)胞的脂毒性也不相同。NAFLD時體內(nèi)脂肪酸特別是具有重要生物學(xué)意義的n-3和n-6多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)的構(gòu)成比例發(fā)生了怎樣的改變？哪些種類的脂肪酸為NAFLD的保護(hù)性因素？哪些種類的脂肪酸為NAFLD的危險性因素？這些問題值得深入研究。
　　單核苷酸多態(tài)性(single

3、nucleotide polymorphisms,SNPs)作為第三代遺傳多態(tài)性標(biāo)記，廣泛存在于人類基因組中。SNP無論發(fā)生在基因的編碼區(qū)還是非編碼區(qū)，都有可能導(dǎo)致基因的表達(dá)差異。脂代謝異常與脂肪酸生物合成和β-氧化分解途徑平衡的破壞密切相關(guān)，而這兩條途徑中參與催化反應(yīng)的關(guān)鍵酶是重要的影響因素。那么編碼這些關(guān)鍵酶的基因是否具有NAFLD的SNP易感位點(diǎn)？這些SNP位點(diǎn)是否對會對該基因的表達(dá)產(chǎn)生影響？是否與NAFLD狀態(tài)下脂肪酸組成譜的改

4、變相關(guān)呢？
　　本研究以中國北方漢族人群為研究對象，首先采用毛細(xì)管氣相色譜法檢測分析NAFLD人群血清脂肪酸譜的改變，選出與NAFLD關(guān)系密切的脂肪酸作為研究的靶點(diǎn)，探討脂肪酸代謝相關(guān)基因的SNP與NAFLD易感性，NAFLD時脂肪酸代謝異常三者之間的關(guān)系，以期闡明基因多態(tài)性與脂肪酸代謝異常在NAFLD發(fā)生發(fā)展中的作用，為臨床篩選NAFLD高危人群，預(yù)測個體發(fā)病風(fēng)險以及制定合理的膳食指導(dǎo)和藥物治療方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

5、>　　第一部分：非酒精性脂肪性肝病人群血清脂肪酸譜及去飽和酶活性分析
　　目的：
　　了解NAFLD患者體內(nèi)脂肪酸代謝改變情況以及去飽和酶△5D和△6D(PUFAs合成的限速酶)的活性變化，為研究NAFLD時脂肪酸代謝紊亂機(jī)制尋找靶點(diǎn)。
　　方法：
　　選擇符合條件的研究對象共866例，按照病例對照研究分組(健康人421例，NAFLD患者445例)，測量腰圍(waist circumference,WC)、收縮壓

6、(systolic blood pressure,SBP)及舒張壓(diastolic blood pressure,DBP)，計算體重指數(shù)(body mass index,BMI)；收集空腹血清，測定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰島素(fasting insulin,FINS)、甘油三酯(triglycerides,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白膽固醇

7、(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、總游離脂肪酸(free fatty acids,FFAs)及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(ga

8、mma-glutamyl transpeptidase,GGT)，用高效氣相色譜法測定所有受試者空腹血清中主要的14種脂肪酸，先進(jìn)行單因素分析，再用非條件Logistic回歸分析校正混雜因素，分析血清脂肪酸組分變化與NAFLD患病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)性，并用多元線性回歸分析血清脂肪酸組分與TG、TC以及HOMA-IR的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況及生化指標(biāo)
　　NAFLD組與健康對照組(Con組)年齡差別無統(tǒng)計學(xué)意義(

9、P=0.631)；NAFLD組男性比例高于Con組(42.7％vs33.0%, P=0.003)；與Con組相比，NAFLD組的BMI、WC、SBP、DBP明顯高于Con組，P<0.001。
　　與Con組相比，NAFLD組FBG、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、GGT均明顯增高，HDL-C明顯降低，P<0.001；通過公式計算得NAFLD組胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)明顯增加，P<0.001。血清總 FFAs明顯增加

10、(2.09±0.46 mmol/L vs0.82±0.21 mmol/L)，P<0.001。
　　2.血清脂肪酸組分變化與NAFLD患病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)性
　　與Con組相比，NAFLD組C16:0、C16:1n-7、C18:1n-9、C18:3n-3(α-linolenic acid,ALA)、總單不飽和脂肪酸(monounsaturated fatty acids,MUFAs)及總長鏈脂肪酸(long-chain fatty

11、acids, LCFAs)百分含量明顯增加，校正混雜因素后與NAFLD的患病風(fēng)險呈正相關(guān)，是NAFLD的危險因素，P<0.01。
　　與Con組相比，NAFLD組 C18:0、C20:0、C22:0、C24:0、C18:2n-6(linoleic acid,LA)、C20:4n-6(arachidonic acid, AA)、C22:6n-3(docosahexenoic acid, DHA)、總n-6 PUFAs、總n-3 PU

12、FAs和極長鏈脂肪酸(very long-chain fatty acids,VLCFAs)的百分含量明顯下降，校正混雜因素后與NAFLD的患病風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)，是NAFLD的保護(hù)因素，P<0.01。
　　與Con組相比，NAFLD組C22:4n-6(Docosatetraenoic acid,DTA)百分含量下降，但校正混雜因素后與NAFLD的患病風(fēng)險無相關(guān)性。與Con組相比，NAFLD組 C20:5n-3(eicosapentae

13、noic acid,EPA)、C22:5n-3(docosapentaenoic acid,DPA)、總飽和脂肪酸（saturated fatty acid,SFAs），總不飽和脂肪酸(unsuaturated fatty acids，UFAs)、SFAs/UFAs和n-6/n-3比值沒有明顯變化，與NAFLD的患病風(fēng)險無相關(guān)性。
　　用AA/LA和EPA/ALA的比值表示n-6和n-3 PUFAs合成途徑△5D和△6D的總活性。

14、與Con組相比，NAFLD組AA/LA和EPA/ALA明顯降低，校正混雜因素后與NAFLD的患病風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)，是NAFLD的保護(hù)因素，P<0.01。
　　3.血清脂肪酸組分與血脂以及HOMA-IR的關(guān)聯(lián)性
　　C16:0、C18:1n-9、ALA、總MUFAs、總LCFAs與TG呈正相關(guān)，P<0.001；C18:0、LA、C20:0、DTA、DHA、C24:0、總n-6 PUFAs、總n-3 PUFAs、總VLCFAs和EP

15、A/ALA與TG呈負(fù)相關(guān)，P<0.01。
　　C16:1n-7與TC呈正相關(guān)，P<0.001；C18:0、DTA、DHA、總VLCFAs與TC呈負(fù)相關(guān)，P<0.05。
　　C16:0、C18:1n-9、總MUFAs與HOMA-IR呈正相關(guān)，P<0.05；C18:0、LA、總n-6 PUFAs與HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)，P<0.01。
　　小結(jié)：
　　1.C16:0、C16:1n-7、C18:1n-9、C18:3n-

16、3(ALA)與NAFLD的患病風(fēng)險呈正相關(guān)，高水平的上述脂肪酸是NAFLD的危險因素；C18:0、C20:0、C22:0、C24:0、C18:2n-6(LA)、C20:4n-6(AA)、C22:6n-3(DHA)與NAFLD的患病風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)，高水平的上述脂肪酸是NAFLD的保護(hù)因素。
　　2.NAFLD人群血清AA和DHA的含量降低與n-6和n-3 PUFAs合成途徑去飽和酶總活性下降有關(guān)。
　　第二部分：FADS1-FA

17、DS2基因多態(tài)性與非酒精性脂肪性肝病及其血清PUFAs變化的關(guān)聯(lián)性研究
　　目的：
　　探討FADS1-FADS2基因簇的單核苷酸多態(tài)性與NAFLD患病風(fēng)險及其血清PUFAs之間的相關(guān)性。
　　方法：選擇符合條件的研究對象866例(入選和排除標(biāo)準(zhǔn)同第一部分研究)，收集外周血，提取DNA，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix Assisted Laser Desorption/ionization Time

18、of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS)實(shí)驗(yàn)平臺進(jìn)行DNA的SNPs分型。先進(jìn)行單因素分析，再用非條件Logistic回歸分析校正混雜因素，分析FADS1-FADS2基因簇的rs174545、rs2072114、rs174602和rs174616四個SNP位點(diǎn)及其構(gòu)建出的單體型與NAFLD易感性以及NAFLD狀態(tài)下血清PUFAs和血脂變化的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：
　　1.FADS1-FA

19、DS2基因簇各SNPs位點(diǎn)分型結(jié)果
　　河北地區(qū)漢族人群中，F(xiàn)ADS1基因存在rs174545位點(diǎn)， FADS2基因存在rs2072114、rs174602和rs174616位點(diǎn)。
　　2.FADS1-FADS2基因簇各SNPs位點(diǎn)等位基因頻率分析
　　FADS2基因rs174602位點(diǎn)次要等位基因G在NAFLD組的頻率(0.184)明顯低于Con組(0.235)，攜帶 rs174602位點(diǎn)次要等位基因 G的個體NAF

20、LD患病風(fēng)險下降，OR值為0.735(95%CI=0.582-0.927，P=0.009)。與Con組比較，NAFLD組FADS1基因rs174545位點(diǎn)，F(xiàn)ADS2基因rs2072114和rs174616位點(diǎn)的等位基因頻率差異不明顯，均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.FADS1-FADS2基因簇各SNPs位點(diǎn)基因型與NAFLD發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性
　　FADS2基因rs174602位點(diǎn)與NAFLD的易感性存在負(fù)相關(guān)。在共顯性模型下，攜

21、帶rs174602 AG或rs174602 GG基因型的個體NAFLD的患病風(fēng)險低于攜帶rs174602 AA基因型的個體(AG vs AA:OR=0.728,95%CI=0.537-0.986,P=0.041;GG vs AA: OR=0.389,95%CI=0.171-0.885, P=0.024)；在顯性模型下，與攜帶rs174602 AA基因型的個體比較，攜帶rs174602(AG+GG）基因型的個體發(fā)生NAFLD的風(fēng)險降低，O

22、R值為0.657(95%CI=0.492-0.878，P=0.013)；在隱性模型下，與攜帶rs174602(AA+AG)基因型的個體比較，攜帶rs174602 GG基因型的個體發(fā)生NAFLD的風(fēng)險降低，OR值為0.317(95%CI=0.131-0.767,P=0.021)。
　　FADS1基因rs174545位點(diǎn)，F(xiàn)ADS2基因rs2072114和rs174616位點(diǎn)與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)，在3種分析模型下差異均無統(tǒng)計學(xué)

23、意義。
　　4.FADS1-FADS2基因簇各SNPs位點(diǎn)單體型的構(gòu)建與分析
　　rs174545，rs2072114和rs174602三個SNP位點(diǎn)間分別存在較強(qiáng)的LD(D′>0.5)，構(gòu)成的MiA單體型GGG與NAFLD的易感性相關(guān)，為NAFLD的保護(hù)因素(OR=0.702,95%CI=0.519-0.949, P=0.021)，攜帶MiA單體型GGG的個體NAFLD發(fā)病風(fēng)險較低。其構(gòu)成的其余5種單體型頻率在Con組和N

24、AFLD組中的分布差異不明顯，與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)。
　　5.rs174602A>G突變對PUFAs和血脂影響的分析
　　按照顯性模型分別對Con組和NAFLD組中攜帶rs174602AA基因型和攜帶rs174602（AG+GG）基因型的個體血清PUFAs百分含量，AA/LA和EPA/ALA比值以及血脂(TG、TC)的差異進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示：在Con組中，與攜帶rs174602 AA基因型的個體比較，攜帶rs174

25、602(AG+GG)基因型的個體LA升高，P<0.01；AA降低，AA/LA比值降低，P<0.001；在NAFLD組中，與攜帶rs174602AA基因型的個體比較，攜帶rs174602(AG+GG)基因型的個體LA、EPA/ALA比值升高，P<0.05；AA、TC降低， AA/LA比值下降，P<0.05。對n-3系PUFAs沒有影響。
　　6.FADS1-FADS2基因簇的MiA單體型GGG對PUFAs和血脂影響的分析
　　

26、按照是否攜帶MiA單體型GGG分別對Con組和NAFLD組中攜帶MiA單體型GGG的個體和不攜帶MiA單體型GGG的個體血清PUFAs百分含量，AA/LA和EPA/ALA比值以及血脂(TG、TC)的差異進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示：在Con組中，與不攜帶MiA單體型GGG的個體比較，攜帶MiA單體型GGG的個體LA升高，P<0.05；AA、AA/LA比值降低，P<0.001。在NAFLD組中，與不攜帶MiA單體型GGG的個體比較，攜帶MiA單體

27、型GGG的個體LA升高，P<0.05；AA、TC、AA/LA比值降低，P<0.05。
　　小結(jié)：
　　1.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn)FADS2基因的rs174602位點(diǎn)與NAFLD的易感性負(fù)相關(guān)，rs174602次要等位基因G為NAFLD的保護(hù)性因素，并且隨著次要等位基因G的積累，個體發(fā)生NAFLD的風(fēng)險逐漸下降。
　　2.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn) FADS1-FADS2基因簇由rs174545-rs2072

28、114-rs174602的次要等位基因構(gòu)成的MiA單體型GGG與NAFLD的易感性負(fù)相關(guān)，為NAFLD的保護(hù)性因素。
　　第三部分：過氧化物酶體脂肪酸β-氧化關(guān)鍵酶基因多態(tài)性與非酒精性脂肪性肝病及其血清VLCFAs變化的關(guān)聯(lián)性研究
　　目的：
　　探討過氧化物酶體脂肪酸β-氧化關(guān)鍵酶(ACOX1、EHHADH、ACAA1、ACOX2、HSD17B4、SCP2)的單核苷酸多態(tài)性與 NAFLD患病風(fēng)險及其血清VLCFAs之

29、間的相關(guān)性。
　　方法：
　　選擇符合條件的研究對象866例(入選和排除標(biāo)準(zhǔn)同第一部分研究)，收集外周血，提取DNA，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix Assisted Laser Desorption/ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS)實(shí)驗(yàn)平臺進(jìn)行DNA的SNPs分型。先進(jìn)行單因素分析，再用非條件Logistic回歸分析校正混雜

30、因素，分析6個過氧化物酶體脂肪酸β-氧化關(guān)鍵酶(ACOX1、EHHADH、ACAA1、ACOX2、HSD17B4、SCP2)的17個SNP位點(diǎn)及其構(gòu)建出的單體型與NAFLD易感性以及NAFLD狀態(tài)下血清VLCFAs和血脂變化的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：
　　1.過氧化物酶體脂肪酸β-氧化體系關(guān)鍵酶基因各SNPs位點(diǎn)基因分型結(jié)果
　　在河北地區(qū)漢族人群中，ACOX1基因存在rs12430、rs7219716和rs8065144位

31、點(diǎn)，EHHADH基因存在rs4687136、rs2160815、rs1509501和rs2284994位點(diǎn)，ACAA1基因存在rs156265和rs2239621位點(diǎn)，ACOX2基因存在rs4317122、rs4681689和rs4387990位點(diǎn)，HSD17B4基因存在rs2075698、rs3756513、rs10064000和rs3797371位點(diǎn)。SCP2基因的rs3766765位點(diǎn)分型失敗。
　　2.過氧化物酶體β-氧化

32、體系關(guān)鍵酶基因各SNPs位點(diǎn)等位基因頻率分析
　　ACOX1基因rs12430位點(diǎn)次要等位基因T在NAFLD組的頻率(0.08)明顯低于Con組(0.11)，攜帶rs12430位點(diǎn)次要等位基因T的個體NAFLD患病風(fēng)險下降，是攜帶 rs12430位點(diǎn)主要等位基因 C個體的0.698倍(95%CI=0.505-0.966，P=0.029)。
　　與Con組比較，NAFLD組ACOX1基因rs7219716和rs8065144位

33、點(diǎn)，EHHADH基因rs4687136、rs2160815、rs1509501和rs2284994位點(diǎn)，ACAA1基因rs156265和rs2239621位點(diǎn)，ACOX2基因rs4317122、rs4681689和rs4387990位點(diǎn)以及HSD17B4基因rs2075698、rs3756513、rs10064000和rs3797371位點(diǎn)的等位基因頻率差異不明顯，均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.過氧化物酶體β-氧化體系

34、關(guān)鍵酶基因各SNPs位點(diǎn)基因型與NAFLD發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性
　　ACOX1基因rs12430位點(diǎn)與NAFLD的易感性存在相關(guān)。在共顯性模型下，與攜帶rs12430主要等位基因純合子基因型CC的個體比較，攜帶rs12430 CT基因型的個體NAFLD的患病風(fēng)險降低(OR=0.696,95%CI=0.489-0.990,P=0.044)；在顯性模型下，與攜帶rs12430 CC基因型的個體比較，攜帶rs12430(CT+TT)基因型的

35、個體發(fā)生 NAFLD的風(fēng)險降低，OR值為0.575(95%CI=0.340-0.972,P=0.039)。
　　ACAA1基因rs156265位點(diǎn)與NAFLD的易感性存在相關(guān)。在共顯性模型下，與攜帶rs156265主要等位基因純合子基因型CC的個體比較，攜帶rs156265次要等位基因純合子基因型GG的個體NAFLD的患病風(fēng)險升高(OR=1.634,95%CI=1.051-2.541,P=0.029)。在隱性模型下，與攜帶rs15

36、6265(CC+CG)基因型的個體比較，攜帶rs156265 GG基因型的個體發(fā)生NAFLD的風(fēng)險變化更高，OR值為OR=1.809(95%CI=1.191-2.748,P=0.005)。
　　ACOX1基因的rs7219716和rs8065144，EHHADH基因的rs4687136、rs2160815、rs1509501和rs2284994，ACAA1基因的rs2239621，ACOX2基因的rs4317122、rs46816

37、89和rs4387990，HSD17B4基因的rs2075698、rs3756513、rs10064000和rs3797371共十四個位點(diǎn)與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)，在3種分析模型下差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.過氧化物酶體β-氧化體系關(guān)鍵酶基因各SNPs位點(diǎn)單體型的構(gòu)建與分析
　　ACOX1基因的rs12430、rs7219716和rs8065144三個SNP位點(diǎn)間分別存在較強(qiáng)的LD(D′>0.5)，其構(gòu)成的單體型CCG

38、在NAFLD組的頻率(0.073)明顯高于Con組(0.045)，為NAFLD的危險因素(OR=1.639,95%CI=1.086-2.473,P=0.018)，攜帶單體型CCG的個體NAFLD發(fā)病風(fēng)險增高。其構(gòu)成的其余4種單體型頻率在Con組和NAFLD組中的分布差異不明顯，與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)。
　　EHHADH基因rs4687136、rs2160815、rs1509501和rs2284994四個SNP位點(diǎn)構(gòu)建的5種單

39、體型與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)。ACAA1基因的rs156265和rs2239621兩個SNP位點(diǎn)構(gòu)建的3種單體型與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)。ACOX2基因的rs4317122、rs4681689和rs4387990三個SNP位點(diǎn)構(gòu)建的6種單體型與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)。HSD17B4基因的rs2075698、rs3756513和rs10064000三個位點(diǎn)構(gòu)建的4種單體型與NAFLD的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)。
　　5.rs124

40、30 C>T突變對VLCFAs和血脂影響的分析
　　按照顯性模型分別對Con組和NAFLD組中攜帶rs12430 CC基因型和攜帶rs12430(CT+TT)基因型的個體血清VLCFAs百分含量及血脂(TG、TC)的差異進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：在Con組中，與攜帶rs12430 CC基因型的個體比較，攜帶rs12430(CT+TT)基因型的個體血清VLCFAs百分含量以及TG、TC變化不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在NAFLD組中，與攜帶

41、rs12430 CC基因型的個體比較，攜帶rs12430(CT+TT)基因型的個體TC降低，P<0.05；對其他VLCFAs百分含量以及TG沒有影響。
　　6.rs156265 C>G突變對VLCFAs和血脂影響的分析
　　按照共顯性模型分別對Con組和NAFLD組中攜帶rs156265 CC基因型、攜帶 rs156265 CG基因型和攜帶rs156265 GG基因型的個體血清VLCFAs百分含量及血脂(TG、TC)的差異進(jìn)

42、行分析，結(jié)果顯示：在Con組中，攜帶rs156265 CC基因型，攜帶rs156265 CG基因型和攜帶rs156265 GG基因型的個體血清VLCFAs百分含量以及TG、TC變化不明顯，三組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。在NAFLD組中，與攜帶rs156265 CC基因型的個體比較，攜帶rs156265 GG基因型的個體C22:0、DPA降低，P<0.05；其余VLCFAs百分含量以及TG、TC變化不明顯，三組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　

43、7.ACOX1基因的單體型CCG對VLCFAs和血脂影響的分析
　　按照是否攜帶單體型CCG分別對Con組和NAFLD組中攜帶單體型CCG的個體和不攜帶單體型CCG的個體血清VLCFAs百分含量以及血脂(TG、TC)的差異進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示：在Con組中，與不攜帶單體型CCG的個體比較，攜帶單體型CCG的個體DTA降低，P<0.05；對其他VLCFAs百分含量以及TG、TC沒有影響；在NAFLD組中，與不攜帶單體型CCG的個體比

44、較，攜帶單體型CCG的個體DTA、DHA、總VLCFAs降低，P<0.05；對其他VLCFAs百分含量以及TG、TC沒有影響。
　　小結(jié)：
　　1.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn)ACOX1基因的rs12430位點(diǎn)與NAFLD的易感性負(fù)相關(guān)，rs12430次要等位基因T為NAFLD的保護(hù)性因素。
　　2.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn)ACOX1基因由rs12430-rs7219716-rs8065144構(gòu)成的單體型CCG

45、與NAFLD的易感性正相關(guān)，為NAFLD的危險因素。
　　3.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn)ACAA1基因的rs156265位點(diǎn)與NAFLD的易感性正相關(guān)，rs156265次要等位基因純合子基因型 GG為NAFLD的危險因素。
　　第四部分：單核苷酸多態(tài)性對過氧化物酶體脂肪酸β-氧化關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響
　　目的：
　　從基因表達(dá)角度探討rs156265 C>G影響NAFLD發(fā)病風(fēng)險的分子機(jī)制
　　方法：<

46、br>　　提取人全血總 RNA，分離外周血白細(xì)胞，檢測攜帶 rs156265不同基因型個體ACAA1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.攜帶rs156265不同基因型的個體ACAA1 mRNA的表達(dá)變化
　　ACAA1mRNA在人外周血白細(xì)胞有低水平的表達(dá)。
　　正常人群中，攜帶rs156265 CC基因型，攜帶rs156265 CG基因型和攜帶rs156265 GG基因型的個體外周血白細(xì)胞中ACA

47、A1 mRNA的相對表達(dá)量變化不明顯，三組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　NAFLD人群中，攜帶rs156265 CC基因型，攜帶rs156265 CG基因型和攜帶rs156265 GG基因型的個體外周血白細(xì)胞中ACAA1 mRNA的相對表達(dá)量變化不明顯，三組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.攜帶 rs156265不同基因型的個體 ACAA1蛋白(PTH1)水平的表達(dá)變化
　　Western blot結(jié)果顯示

48、，與攜帶rs156265 CC基因型的個體比較，攜帶rs156265 CG和GG基因型的個體外周血白細(xì)胞中PTH1蛋白含量均明顯減少。
　　小結(jié)：
　　1.攜帶rs156265(CG+GG)基因型的個體ACAA1基因蛋白水平表達(dá)下降。
　　2.ACAA1蛋白水平下降可能與攜帶rs156265 GG基因型的NAFLD人群C22:0的降低無關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.C16:0、C16:1n-7、C18:1n-9

49、、C18:3n-3(ALA)與NAFLD的患病風(fēng)險呈正相關(guān)，是 NAFLD的危險因素；C18:0、C20:0、C22:0、C24:0、C18:2n-6(LA)、C20:4n-6(AA)、C22:6n-3(DHA)與NAFLD的患病風(fēng)險呈負(fù)相關(guān)，是NAFLD的保護(hù)因素。
　　2.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn) FADS2基因的rs174602和ACOX1基因的rs12430與NAFLD的易感性負(fù)相關(guān)，rs174602次要等位基因G和

50、rs12430次要等位基因T為NAFLD的保護(hù)性因素；ACAA1基因的rs156265與NAFLD的易感性正相關(guān)，rs156265次要等位基因純合子基因型GG為NAFLD的危險因素。
　　3.在中國北方漢族人群中，首次發(fā)現(xiàn)FADS1-FADS2基因簇的MiA單體型GGG(rs174545-rs2072114-rs174602)與NAFLD的易感性負(fù)相關(guān)，為NAFLD的保護(hù)性因素；ACOX1基因的單體型CCG(rs12430-rs7