2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、Ca2+是細胞中普遍存在的第二信號分子,它調(diào)控許多不同的細胞內(nèi)進程,包括細胞增殖,發(fā)育,遷移,分泌,學習和記憶。鈣調(diào)素(CaM)是細胞內(nèi)Ca2+信號的主要受體,在細胞增殖、分化、凋亡、遷移等過程中都起著重要作用。由于CaM 本身并不具有任何酶活性,其發(fā)揮生物學效應(yīng)的關(guān)鍵在于它能夠和鈣調(diào)蛋白效應(yīng)因子結(jié)合,引起這些效應(yīng)因子生物學活性的改變,進而參與生命活動的調(diào)控。
   因此,研究鈣調(diào)蛋白效應(yīng)因子有助于進一步揭示CaM的生理功能。為

2、了更好地研究CaM在細胞周期調(diào)控中的重要作用,就要試圖找到CaM在周期細胞中的下游效應(yīng)因子。為此我們設(shè)計了一種新型大規(guī)模篩選CaM 結(jié)合蛋白的實驗。
   我們通過Cre-loxP位點特異性重組技術(shù)構(gòu)建了一個帶有CFP 熒光蛋白標記的文庫,與YFP-CaM 共同轉(zhuǎn)染細胞,進行熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)檢測。如果發(fā)生熒光能量共振轉(zhuǎn)移并且計算結(jié)果在可信范圍內(nèi),則認為與CaM 發(fā)生相互作用。利用膜片鉗微電極玻璃毛細管吸取發(fā)生FRET

3、的單個細胞,進行單細胞PCR。
   測序擴增出的片段,通過與已知蛋白序列數(shù)據(jù)庫進行比對,得出與CaM 相互作用的蛋白。通過這種手段我們可以篩選出未知的與CaM 相互作用的蛋白,從而為進一步研究CaM 蛋白在生理環(huán)境下的作用提供條件。甚至,我們可以利用這個方法篩選任意兩種相互作用的蛋白,從而豐富了大規(guī)模篩選的方法。目前我們已經(jīng)通過這種方法成功的篩選到了一些與CaM 相結(jié)合的蛋白。從而成功確立這一新的大規(guī)模篩選CaM 結(jié)合蛋白的方

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