基于多靶點策略的抗阿爾茲海默病新化合物DZH的作用及機制研究.pdf

1、目的：評價化合物DZH多靶點作用。
　　方法：1、抗氧化、膽堿酯酶抑制作用及雌激素樣作用的測定
　　通過研究化合物DZH體外一氧化氮清除能力、鐵離子還原能力。同時還考察DZH體內(nèi)抗急性亞硝酸鈉中毒以及對幼年小鼠子宮的影響，以確定化合物DZH抗氧化以及雌激素樣作用。同時還考察了DZH體內(nèi)對膽堿酯酶抑制作用的選擇性。
　　2、對單因素致記憶障礙模型的影響
　　腹腔注射氫溴酸東莨菪堿3 mg/kg致小鼠記憶獲得障礙，灌

2、胃40％乙醇0.01 mL/g致小鼠記憶再現(xiàn)障礙，小鼠海馬內(nèi)注射凝聚態(tài)Aβ1-422μg/只，造模次日進行分組并開始給藥，每天一次，連續(xù)4周，并進行Morris水迷宮以及生化指標檢測，電子顯微鏡觀察海馬區(qū)神經(jīng)元超微結構。
　　3、對復合因素致智力缺陷模型的影響
　?。?）雌性小鼠去勢后30天，海馬內(nèi)注射Aβ1-42和IBO（2μg Aβ1-42,1μg IBO），次日將造模小鼠隨機分組給藥，每天灌胃一次，連續(xù)4周，并進行跳臺

3、、Morris水迷宮以及生化指標的檢測。
　　（2）雌性SD大鼠去勢后第五周，開始神經(jīng)毒性造模（4μg Aβ1-42,1μg IBO），Aβ和IBO造模次日進行分組并開始給藥，持續(xù)5周,并進行用Morris水迷宮、Y迷宮實驗，電鏡觀察大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細胞超微結構。并用western blotting方法檢測腦組織的iNOS蛋白表達。
　　結果：
　　1、化合物DZH具有抗氧化、膽堿酯酶抑制以及雌激素樣作用
　　化

4、合物DZH清除 NO的IC50為356.79μM，鐵離子還原能力的的IC50為126.69μM，明顯延長亞硝酸鈉小鼠的存活時間（P<0.05）；明顯抑制腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性，增加幼年小鼠的子宮重量。
　　2、化合物DZH改善單因素致記憶障礙作用
　　小鼠在腹腔注射東莨菪堿后，其在跳臺實驗的潛伏期明顯縮短，錯誤次數(shù)明顯增加(P<0.05)。灌胃乙醇的小鼠在跳臺實驗的潛伏期明顯縮短，錯誤次數(shù)明顯增加（P<0.05)。而化合物D

5、ZH可以明顯改善東莨菪堿或乙醇導致的小鼠學習記憶能力損傷。Aβ小鼠在Morris水迷宮實驗中找到逃逸平臺的潛伏期明顯延長，進入有效區(qū)域的次數(shù)明顯減少，其腦組織的ACh、ChAT水平，SOD活性明顯降低，其AChE，MDA、NO水平明顯升高（P<0.05或P<0.01），電鏡觀察結果顯示：Aβ小鼠海馬區(qū)出現(xiàn)明顯的病理改變。而化合物DZH可以明顯改善上述指標。
　　3、化合物DZH防治復合因素致智力缺陷模型作用
　?。?）去勢雌

6、性小鼠海馬內(nèi)注射Aβ1-42和鵝膏蕈氨酸混合液可使小鼠在跳臺實驗中的潛伏期明顯縮短，錯誤次數(shù)明顯增多，在Morris水迷宮實驗中的潛伏期明顯縮短，其進入逃逸平臺的次數(shù)、在有效區(qū)域內(nèi)運動距離以及在逃逸平臺上滯留時間明顯減少，并且其腦組織中的ACh含量、SOD活性明顯降低，AChE、MDA活性顯著增加（P<0.01或P<0.05）。化合物DZH9mg/kg,3 mg/kg組可以顯著改善智力缺陷小鼠的學習記憶能力（P<0.01或P<0.05）

7、，明顯對抗其生化指標的改變。
　?。?）去勢雌性SD大鼠雙側腦海馬內(nèi)注射Aβ1-42和鵝膏蕈氨酸混合液可使其在水迷宮實驗中的潛伏期明顯縮短，其有效區(qū)域進入次數(shù)、在有效區(qū)域內(nèi)運動的距離及時間，進入逃逸平臺的次數(shù)以及在逃逸平臺上滯留的時間均明顯減少，在Y迷宮實驗中學習的正確率和記憶正確率明顯降低（P<0.01或P<0.05），其海馬出現(xiàn)明顯的病理改變。而化合物DZH6 mg/kg，2 mg/kg可以改善智力缺陷大鼠在水迷宮實驗及Y迷宮