酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8自身抗體在1型糖尿病的診斷價(jià)值.pdf

1、目的:1型糖尿病（Type1 diabetes mellitus,T1DM）是致病性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞進(jìn)行性破壞為特征的自身免疫性疾病,占糖尿病的5％-10%，半數(shù)患者為青少年，依賴外源性胰島素治療。胰島β細(xì)胞在遺傳易感性的基礎(chǔ)上，由于環(huán)境因素（病毒感染、牛奶喂養(yǎng)、應(yīng)激）的誘發(fā)作用，產(chǎn)生胰島炎癥和β細(xì)胞破壞，胰島β細(xì)胞被破壞后存在于胰島β細(xì)胞內(nèi)的自身抗原釋放后產(chǎn)生胰島自身抗體。1974年首次報(bào)道了胰島細(xì)胞胞漿抗體（islet-c

2、ell cytoplasmic autoantibody,ICA），此后胰島細(xì)胞自身抗體與 T1DM的關(guān)系開(kāi)始引起廣泛關(guān)注。鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8自身抗體（Zinc transporter8 autoantibody,ZnT8A）是新近發(fā)現(xiàn)的胰島β細(xì)胞自身抗體，其在 T1DM的診斷和分型中具有重要的價(jià)值。成人隱匿性自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults,LADA)屬于免疫介導(dǎo)T1DM亞型，早期臨床

3、表現(xiàn)酷似2型糖尿?。═ype2 diabete mellitus,T2DM），診斷后至少6個(gè)月不需要胰島素治療，最終因胰島β細(xì)胞緩慢破壞而依賴外源性胰島素治療。LADA China多中心協(xié)作研究顯示18歲以上初診的T2DM患者中LADA患病率約6.1%，但其胰島功能的衰減速度是T2DM的3倍，自發(fā)性糖尿病酮癥酸中毒(diabetic ketoacidosis,DKA)一般在發(fā)病半年到一年后出現(xiàn)，說(shuō)明正確診斷并及時(shí)胰島素治療LADA非常重

4、要。
　　在疾病的發(fā)展過(guò)程中，ZnT8A會(huì)受到殘存的胰島β細(xì)胞數(shù)量及功能的影響，因此ZnT8A值得密切關(guān)注和監(jiān)測(cè)。此外，除外年齡因素影響，T1DM患者一級(jí)親屬中ZnT8A陽(yáng)性者74%的人在5年內(nèi)發(fā)展為糖尿病，因此ZnT8A對(duì)T1DM的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)有重要價(jià)值。對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體應(yīng)該進(jìn)行篩選和監(jiān)控，一旦發(fā)現(xiàn)血糖異常，及時(shí)進(jìn)行早期治療，以保護(hù)殘存的胰島β細(xì)胞功能。
　　當(dāng)前ZnT8A的檢測(cè)廣泛采用放射配體法(Radio-Binding as

5、say,RBA)，但是其在多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不易實(shí)施。2014年8月20日美國(guó)食品和藥物管理局首次批準(zhǔn)了酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）可用于測(cè)定ZnT8A。本研究采用ELISA測(cè)定ZnT8A，旨在探討ZnT8A在T1DM中的診斷價(jià)值。
　　方法：
　　1.依據(jù)1999年世界衛(wèi)生組織（World Health Organization,WHO）糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，2014年

6、1月－2015年12月選取在我院內(nèi)分泌1科住院的糖尿病病人194例，包括初診時(shí)血清谷氨酸脫酸酶自身抗體（glutamic acid decarboxylase autoantibodies,GADA）陽(yáng)性的T1DM病人84例，其中男性50例，女性34例，中位數(shù)年齡33歲，最小年齡13歲，最大年齡73歲，中位數(shù)病程6年，最短病程7天，最長(zhǎng)病程25年；初發(fā)T2DM病人110例，其中男性69例，女性41例，平均年齡49.32±13.61歲，最

7、小年齡19歲，最大年齡84歲。另設(shè)正常對(duì)照組(normal controls,NC)：選取我院同期常規(guī)體檢的健康人102名，其中男性53名，女性49名，中位數(shù)年齡38.5歲，最小年齡15歲，最大年齡66歲，排除心、腦、肝、腎等慢性疾病及其他內(nèi)分泌疾病。受試者均禁食12小時(shí)后抽取靜脈血兩管各4ml，一管用于生化指標(biāo)的檢測(cè)，另一管分裝于Eppendorf管，保存在一20℃冰箱，用于ZnT8A和GADA的檢測(cè)。
　　2.ELISA測(cè)定血

8、清ZnT8A。
　　3.放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)測(cè)定血清GADA。
　　4.臨床指標(biāo)的測(cè)定
　　4.1 測(cè)量身高、體重、腰圍、臀圍、收縮壓（systolic blood pressure,SBP）、舒張壓（diastolic blood pressure,DBP）。
　　4.2 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglycer

9、ides,TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）和空腹血糖（fasting blood-glucose,FBG）。免疫比濁法測(cè)定糖化血紅蛋白（hemoglobin A1c,HbA1c）百分比。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量

10、資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±s）、中位數(shù)或四分位數(shù)間距表示，計(jì)數(shù)資料用陽(yáng)性例數(shù)、構(gòu)成比或者率表示；計(jì)量資料正態(tài)分布者采用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；偏態(tài)分布者兩個(gè)獨(dú)立樣本比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn),多個(gè)獨(dú)立樣本比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用x2檢驗(yàn)，若某一格的期望值＜5則采用Fishers確切概率法。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.T1DM組、T2DM組和 N

11、C組 ZnT8A的濃度中位數(shù)分別是13.71U/ml、6.33U/ml和2.02U/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=147.640，P＜0.01），T1DM組ZnT8A濃度高于T2DM組和NC組（Z分別為-9.710和-9.623，均P＜0.01），T2DM組ZnT8A濃度高于NC組（Z為-7.279，P＜0.01）。ZnT8A陽(yáng)性率分別是23.8%（20/84），0%（0/110）和1%（1/102），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=49.71

12、9，P＜0.01），T1DM ZnT8A陽(yáng)性率顯著高于T2DM組和正常對(duì)照組（分別x2=29.201和23.970，均P＜0.01），T2DM組和NC組陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組GADA的濃度中位數(shù)分別是1.91U/ml，0.066U/ml和0.063U/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=147.570，P＜0.01），T1DM組較T2DM組和NC組GADA的濃度更高（Z分別為-10.965和-10.421，均P＜0.01），T2DM組和NC

13、組GADA濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。T1DM組在GADA陽(yáng)性的基礎(chǔ)上聯(lián)合檢測(cè)ZnT8A后自身抗體陽(yáng)性率由58.3%（49/84）變?yōu)?7.9%（57/84），陽(yáng)性率增加9.6%。
　　2.經(jīng)典T1DM組（初診年齡＜18歲）和LADA組（初診年齡≥18歲）ZnT8A濃度中位數(shù)是13.40U/ml和13.71U/ml，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ZnT8A陽(yáng)性率分別是40%（8/20）和18.8%（12/64），亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組GADA濃度中位數(shù)是1.

14、20U/ml和3.14U/ml，LADA組GADA濃度更高（Z為-2.107，P＜0.05），兩組GADA的陽(yáng)性率分別是50%（10/20）和60.9%（39/64），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。檢測(cè)GADA的基礎(chǔ)上聯(lián)合ZnT8A后自身抗體的陽(yáng)性率經(jīng)典T1DM組由50%（10/20）變?yōu)?5%（13/20），陽(yáng)性率增加15%，LADA組由60.9%（39/64）變?yōu)?8.7%（44/64），陽(yáng)性率增加7.8%。
　　3.T1DM組根據(jù)初診年齡分

15、為年齡＜18歲組、18歲≤年齡＜30歲組和年齡≥30歲組三組。ZnT8A的濃度中位數(shù)分別是13.40U/ml、14.74U/ml和13.59U/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.901，P＜0.05)，18歲≤初診年齡＜30歲組較初診年齡≥30歲組ZnT8A的濃度更高（Z為-2.263，P＜0.01）；年齡＜18歲組與18歲≤初診年齡＜30歲組、初診年齡≥30歲組無(wú)差異。三組ZnT8A的陽(yáng)性率分別是40%（8/20）、50%(10/20

16、)和4.5%（2/44），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=19.454，P＜0.01），初診年齡<18歲組和初診18≤初診年齡＜30歲組 ZnT8A陽(yáng)性率顯著高于初診年齡≥30歲組（分別x2=10.559和15.784，P＜0.01）。初診年齡<18歲組和18≤初診年齡<30組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三組GADA的濃度中位數(shù)分別是1.20U/ml、0.53U/ml和6.9U/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=16.911，P＜0.01)，初診年齡≥30歲

17、組較初診年齡＜18歲組、18歲≤初診年齡＜30歲組GADA的濃度更高（Z值分別為-3.217、-3.391，均P＜0.01），初診診年齡＜18歲組與18歲≤初診年齡＜30歲組無(wú)差異。三組GADA的陽(yáng)性率分別是50%（10/20）、40%(8/20)和71.5%(31/44)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.T1DM組根據(jù)病程分為病程＜1年組、1年≤病程＜5年組和病程≥5年組三組，三組ZnT8A濃度中位數(shù)分別是13.54U/ml、14.

18、04U/ml和13.42U/ml，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組ZnT8A的陽(yáng)性率分別是33.3%（6/18）、21.4%（3/14）和21.2%（11/52），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組GADA的濃度中位數(shù)分別是2.15U/ml、0.85U/ml和2.13U/ml，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組GADA的陽(yáng)性率分別是55.6%(10/18)、50%(7/14)和61.5%（32/52），亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5.T1DM組根據(jù)BMI分為BMI<24kg/m2、

19、24kg/m2≤BMI＜28kg/m2和BMI≥28kg/m2分為三組，三組ZnT8A濃度的中位數(shù)分別是13.78U/ml、13.44U/ml和14.27U/ml，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組ZnT8A陽(yáng)性率分別是25.8%（17/65）、23.1%（3/13）和0%(0/6)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組GADA的濃度分別是2.35U/ml、0.69U/ml和0.09U/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=8.978，P＜0.05），BMI<24kg/m2組、

20、24kg/m2≤BMI＜28kg/m2組較BMI≥28kg/m2組GADA濃度更高（Z分別為-2.834和-2.923，均P＜0.01），24kg/m2≤BMI＜28kg/m2和BMI<24kg/m2組GADA濃度無(wú)差別。三組GADA的陽(yáng)性率分別是68.2%（45/66）、30.8%（4/13）和0%(0/5)，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=15.49，P＜0.01），BMI<24kg/m2組GADA陽(yáng)性率顯著高于BMI≥28kg/m2組(

21、x2=7.486，P＜0.01)，24kg/m2≤BMI＜28kg/m2與其余兩組比較GADA的陽(yáng)性率無(wú)差別。
　　6.T1DM組分成單一GADA陽(yáng)性組、單一ZnT8A陽(yáng)性組、GADA或ZnT8A陽(yáng)性組和GADA且ZnT8A陽(yáng)性組四組，四組陽(yáng)性率分別是44.0%（37/84）、9.5%(8/84)、67.9%(57/84)和14.3%（12/84），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=83.748，P＜0.01）。GADA或ZnT8A組陽(yáng)性率

22、顯著高于單一GADA組、單一ZnT8A組和GADA且ZnT8A組的陽(yáng)性率（分別x2=9.661、60.249和49.802，均P＜0.001）；單一GADA組陽(yáng)性率顯著高于單一ZnT8A組、GADA且ZnT8A組的陽(yáng)性率（分別x2=25.526和18.007，均P＜0.001）；GADA且ZnT8A組陽(yáng)性率與單一ZnT8A組陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　7.ROC曲線分析ZnT8A的敏感度和特異度分別是23.8%和99%(陽(yáng)性切點(diǎn)值是

23、15U/ml)，曲線下面積是0.91（95%CI,0.87-0.95）。
　　8.T1DM組分為ZnT8A陽(yáng)性組和ZnT8A陰性組，兩組比較ZnT8A陽(yáng)性組中位數(shù)年齡、初診年齡更?。╖分別為-3.268和-3.496，均P＜0.01）， HbA1C、FBG更高（t為2.670、Z為-2.621，分別P＜0.01、P＜0.05），更容易發(fā)生酮癥（?2=6.159，P＜0.05）。而性別、家族史、病程、BMI、WHR、SBP、DBP、