尿酸對肝細(xì)胞氧化應(yīng)激及線粒體功能影響的研究.pdf

1、目的：探討尿酸對肝細(xì)胞氧化應(yīng)激及線粒體功能的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)人肝細(xì)胞（L-02），分別加入0、5、10、20、30mg/dL尿酸干預(yù)（0mg/dL為對照組），干預(yù)時間為24、48、72、96h。電鏡觀察肝細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)。MTT法檢測肝細(xì)胞活力。Annexin V-FITC/PI雙染法，流式檢測肝細(xì)胞凋亡。試劑盒檢測肝細(xì)胞功能指標(biāo)AST和ALT；DNA損傷指標(biāo)8-OhdG；線粒體功能指標(biāo) SDH、CCO和ATP；氧化應(yīng)激指

2、標(biāo)MDA、GSH及SOD的水平。DCFH-DA標(biāo)記，熒光顯微鏡拍照法檢測ROS。Westen blot檢測Nrf2-ARE信號通路下游SOD、GSH和γ-GCS蛋白水平；RT-PCR檢測Nrf2-ARE信號通路下游SOD和GSH的mRNA水平。
　　結(jié)果：1.肝細(xì)胞形態(tài)及凋亡：在尿酸為20mg/dL時肝細(xì)胞出現(xiàn)形狀不規(guī)則、表面絨毛較少，出現(xiàn)凋亡及壞死細(xì)胞；在＞20mg/dL,作用72～96h后肝細(xì)胞凋亡率大于對照組（P＜0.05）

3、。2.肝細(xì)胞功能及DNA損傷：ALT、AST在尿酸＞20mg/dL,作用72～96h后高于對照組（P＜0.05）；8-OhdG隨尿酸水平增加及作用時間延長呈升高趨勢，30mg/dL尿酸組最高；3.肝細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)：SOD、GSH在尿酸為20mg/dL，作用48～72h后較對照組降低（P＜0.05）；MDA、ROS在尿酸＞20mg/dL，作用96h后較對照組均增大（P＜0.05）。4.肝細(xì)胞Nrf2-ARE下游mRNA水平及蛋白的表達(dá)：

4、SOD和GSH mRNA水平在尿酸＞10mg/dL，作用48～72h后較對照組降低（P＜0.05）；SOD、GSH和γ-GCS蛋白在尿酸為30mg/dL，作用24、72h后較對照組降低（P＜0.05）；5.線粒體功能指標(biāo)：ATP、SDH和CCO在尿酸＞10mg/dL,作用24～72h后高于對照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：高水平尿酸（＞20mg/dL）可誘導(dǎo)肝細(xì)胞形態(tài)改變，肝細(xì)胞活力及凋亡增加，并可能通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激加劇對肝細(xì)胞