腫瘤相關(guān)自身抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值.pdf

1、乳腺癌是全球女性中最常見(jiàn)的癌癥，也是女性癌癥死亡的主要原因。目前，乳腺 X線攝影術(shù)是診斷乳腺癌的常用技術(shù)，卻因患者年齡和乳腺組織密度的差異不能在人群中普及。腫瘤相關(guān)自身抗體作為一種血清學(xué)標(biāo)志物受到很多學(xué)者的青睞。然而，大多數(shù)研究采用常規(guī)的間接ELISA法仍未發(fā)現(xiàn)對(duì)乳腺癌具有較高診斷潛力的自身抗體標(biāo)志物或自身抗體譜。
　　目的:
　　本研究旨在采用一種相對(duì)定量的間接ELISA法評(píng)估p53, cyclin B1, cyclin

2、D1, p16, IMP1, p62, koc, c-myc, survivin,14-3-3ξ和RalA11種腫瘤相關(guān)自身抗體的檢測(cè)對(duì)乳腺癌免疫診斷的價(jià)值，并建立一個(gè)對(duì)乳腺癌具有更高診斷潛力的自身抗體組合。
　　方法:
　　1.采用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)和pET-28a(+)表達(dá)質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)6×組氨酸標(biāo)記的p53, p62,14-3-3ξ和RalA四種重組蛋白，并通過(guò)鎳柱親和層析法純化蛋白。
　　2.按照診斷實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)樣

3、本含量的估計(jì)方法用 PASS13.0軟件估算所需樣本量。本研究共收集415份血清，包括197例乳腺癌患者的血清，109例乳腺良性疾病患者的血清和109例正常人的血清。
　　3.采用間接ELISA法檢測(cè)血清中自身抗體的含量，并在其基礎(chǔ)上加入梯度稀釋的Ig G標(biāo)準(zhǔn)品，用以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線從而標(biāo)準(zhǔn)化ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果，此種方法被稱為相對(duì)定量ELISA法。通過(guò)免疫印跡試驗(yàn)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　4.采用單因素方差分析和SNK

4、法比較各組間自身抗體相對(duì)含量是否相同；采用卡方檢驗(yàn)比較自身抗體在乳腺癌組與對(duì)照組中陽(yáng)性率的差異。采用診斷試驗(yàn)的評(píng)價(jià)方法，對(duì)單個(gè)自身抗體檢測(cè)乳腺癌以及多個(gè)自身抗體并聯(lián)檢測(cè)乳腺癌的診斷真實(shí)性和可靠性進(jìn)行評(píng)估。采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析各個(gè)自身抗體在不同臨床分期患者中的含量是否有差異。
　　結(jié)果:
　　1.本研究成功純化出了p53, p62,14-3-3ξ和RalA四種重組蛋白，濃度分別為0.24 mg/ml，0.1

5、9mg/ml，0.76mg/ml和0.50mg/ml，四種蛋白的純度較高。
　　2. p53, cyclin B1, p16, p62, c-myc, survivin和14-3-3ξ自身抗體在乳腺癌組的陽(yáng)性率顯著高于乳腺良性疾病組(P<0.05)和正常對(duì)照組(P<0.01)。其中，靈敏度最高的是cyclin B1自身抗體，其靈敏度為23.9％，其次為抗survivin抗體(19.3%)和p53(15.6%)自身抗體?？?4-3-

6、3ξ抗體對(duì)乳腺癌也具有一定的診斷價(jià)值，靈敏度為14.7%。
　　3.并聯(lián)檢測(cè)多種自身抗體時(shí)，隨著檢測(cè)指標(biāo)的增加，所得自身抗體組合反應(yīng)的靈敏度從23.9%升高至62.4%。自身抗體組合的受試者工作特征曲線下面積為0.78。
　　4.Ⅰ期乳腺癌患者血清中 p16自身抗體含量明顯高于其它各期的乳腺癌患者(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1. p53, cyclin B1, p16, p62, c-myc, survi