Axl在子癇前期EPCs中的表達(dá)及對(duì)其功能的影響.pdf

1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 Axl在子癇前期患者及正常妊娠者EPCs中的表達(dá)
　　目的：
　　檢測(cè)Axl在子癇前期患者及正常妊娠者的EPCs中的表達(dá)。
　　方法：
　　1.分離并培養(yǎng)兩組患者臍血中的EPCs；
　　2.采用RT-PCR方法測(cè)定兩組EPCs中Axl mRNA的表達(dá)；
　　3.采用Western Blotting方法測(cè)定兩組EPCs中Axl蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)

2、果：
　　1.將臍帶血分離出PBMCS（peripheral blood mononuclear cells）并培養(yǎng)。培養(yǎng)至第七天時(shí)，可見細(xì)胞呈集落樣分布，稱CFUs(clony-forming units)，呈現(xiàn)中心為圓形細(xì)胞，外周為紡錘形細(xì)胞樣的集落。
　　2.子癇前期患者EPCs中的Axl mRNA（25.77±8.69 vs.1.55±0.67, P<0.05）及蛋白（17.00±6.36 vs.1.03±0.20,

3、 P<0.05）的表達(dá)量明顯高于正常妊娠者的EPCs，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　Axl在子癇前期患者EPCs中的表達(dá)高于正常妊娠者。
　　第二部分 Axl抑制劑對(duì)EPCs功能的作用
　　目的：
　　研究抑制EPCs的Axl信號(hào)通路之后，其細(xì)胞增殖能力、分化能力、遷移能力及粘附能力的改變，了解Axl在EPCs功能中所起的作用。
　　方法：
　　1.用臍血分離培養(yǎng)出EPCs，將細(xì)胞分為實(shí)

4、驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中加入Axl抑制劑(BMS777-607，BioVision，USA，已證實(shí)其對(duì)Gas6/Axl信號(hào)通路的抑制作用)，濃度為5.64ng/ml，等體積的DMSO（BMS777-607的溶劑）加入陰性對(duì)照組的培養(yǎng)基中，而空白對(duì)照組培養(yǎng)基不做任何處理，各組EPCs邊培養(yǎng)邊進(jìn)行各項(xiàng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；
　　2.采用CCk8方法檢測(cè)抑制劑處理后的EPCs細(xì)胞增殖能力；
　　3.采用Transwell遷

5、移實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)抑制劑處理后的EPCs細(xì)胞遷移能力；
　　4.采用細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制劑處理后的EPCs細(xì)胞分化能力；
　　5.采用細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制劑處理后的EPCs細(xì)胞粘附能力。
　　結(jié)果：
　　1.各組細(xì)胞經(jīng)處理后，進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組EPCs的增殖能力較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組差(0.97±0.06 vs.1.20±0.11，P<0.01;0.97±0.06 vs.1.18±0.05, p<0.05

6、)且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩個(gè)對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1.20±0.11 vs.1.18±0.05，P>0.5）。
　　2.各組細(xì)胞經(jīng)處理后，進(jìn)行細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組分化的細(xì)胞（21.80±4.33）（紡錘樣）較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組（41.12±2.93，37.80±9.58）少且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(21.80±4.33 vs.41.12±2.93, P<0.05;21.80±4.33 vs.37.80±9.58, P<0.05)

7、)，而兩個(gè)對(duì)照組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(41.12±2.93 vs.37.80±9.58, P>0.5)；此外，統(tǒng)計(jì)分化細(xì)胞所占百分比發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組分化細(xì)胞百分比較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（12.02±2.18 vs.17.78±1.81, P<0.01;12.02±2.18 vs.16.36±2.03, P<0.05），而空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（17.78±1.81 vs.16.36±2.03,P

8、>0.5）。
　　3.各組細(xì)胞經(jīng)處理后，進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的EPCs的遷移數(shù)目少于陰性對(duì)照組(50.35±15.48 vs.79.88±5.69, P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組之間以及空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（50.35±15.48 vs72.40±6.24,P>0.5;72.40±6.24 vs.79.88±5.69,P>0.05）；
　　4.各組細(xì)胞經(jīng)處理后，進(jìn)行細(xì)

9、粘附實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組EPCs的粘附能力（62.90±6.43）較空白對(duì)照組（80.73±4.80）及陰性對(duì)照組(83.20±4.52)弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（62.90±6.43vs.80.73±4.80,P<0.05;62.90±6.43 vs.83.20±4.52, P<0.01）。而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（80.73±4.80 vs.83.20±4.52, P>0.5）。
　　結(jié)論：
　　本研究表