基于CCR1-3-5受體拮抗劑類似物的設(shè)計、合成及在A549侵襲遷移中作用的初步研究.pdf

1、背景：惡性腫瘤是全球發(fā)病和死亡的一個主要原因，在2012年造成820萬人死亡，其中，肺癌占據(jù)所有癌癥死亡病例的20％，是癌癥中死亡率最高的，而非小細(xì)胞肺癌約占所有肺癌的80%，約75%的患者發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期，5年生存率很低。目前，非小細(xì)胞肺癌治療效果并不理想，惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移率高是臨床上導(dǎo)致大部分病人死亡的最主要原因，目前仍沒有好的防治方法。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境存在大量的細(xì)胞趨化因子誘導(dǎo)內(nèi)環(huán)境的間質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞之間相互作用，所產(chǎn)生的免

2、疫炎性反應(yīng)促使了腫瘤的增殖、侵襲、粘附。近年來許多研究發(fā)現(xiàn)趨化因子CCL5與惡性腫瘤的侵襲、遷移相關(guān)。A549細(xì)胞屬于非小細(xì)胞肺癌的一種，它表達(dá)的CCR1、CCR3和CCR5受體與CCL5趨化因子結(jié)合后能夠促使其惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至身體其他部位。我們通過計算機(jī)輔助藥物設(shè)計（CADD）中的虛擬篩選、動力學(xué)模擬（MD）和結(jié)合自由能（MMGB/PBSA）進(jìn)行先導(dǎo)化合物的篩選以及計算機(jī)模擬，并通過合成的先導(dǎo)化合物進(jìn)行生物活性實驗，研究CCR1、C

3、CR3和CCR5受體拮抗劑的結(jié)構(gòu)和抑制非小細(xì)胞肺癌侵襲、遷移能力活性之間的關(guān)系，對設(shè)計出更加有效的CCR1、CCR3和CCR5受體拮抗劑有重大的意義。
　　目的：依據(jù)CCR5受體的晶體結(jié)構(gòu)，同源模建并優(yōu)化CCR1/3受體的蛋白結(jié)構(gòu)，運用分子對接、ADMET等虛擬篩選技術(shù)，共篩選出六個先導(dǎo)化合物，合成先導(dǎo)化合物并進(jìn)行CCK8法增殖-毒性檢測、Transwell腫瘤侵襲、遷移的研究，研究受體拮抗劑和活性之間的關(guān)系。
　　方法：⑴

4、針對已篩選的先導(dǎo)化合物和改造的化合物構(gòu)建其藥效團(tuán)，并通過藥效團(tuán)和CCR5受體以及同源模建的CCR1/3受體進(jìn)行虛擬篩選。最終又篩選到三個化合物。⑵將這篩選的先導(dǎo)化合物和改造的化合物運用分子動力學(xué)研究其結(jié)合關(guān)系并分析其結(jié)合自由能以及氨基酸殘基分析。⑶合成化合物，并對其結(jié)構(gòu)和純度進(jìn)行鑒定和分析。⑷運用CCK8法對先導(dǎo)化合物和改造的化合物進(jìn)行細(xì)胞增殖-毒性檢測。⑸運用Transwell實驗研究化合物的抗腫瘤侵襲、遷移能力。
　　結(jié)果：①

5、構(gòu)建出其先導(dǎo)化合物的藥效團(tuán)；②同源模建的結(jié)構(gòu)優(yōu)化后得到穩(wěn)定的所需CCR1/3受體結(jié)構(gòu)；③成功完成先導(dǎo)化合物、改造的化合物和受體之間的動力學(xué)模擬及結(jié)合自由能的計算；④合成純度很高的所需先導(dǎo)化合物和改造的化合物；⑤CCK8法證明先導(dǎo)化合物和改造的化合物均無細(xì)胞毒性；⑥Transwell實驗證明了化合物具有抗腫瘤侵襲、遷移的作用
　　結(jié)論：⑴藥效團(tuán)篩選結(jié)合動力學(xué)模擬等計算機(jī)輔助藥物設(shè)計手段不僅能夠節(jié)省尋找先導(dǎo)化合物的時間，還能在微觀方面