SFRP5在胰腺癌中的表達意義及其shRNA慢病毒載體的構建.pdf

1、目的：探討 SFRP5基因在胰腺癌組織中的表達情況及其與臨床病理因素和預后的關系，設計和構建人SFRP5-shRNA慢病毒載體，并進行鑒定和包裝，為下一步探索SFRP5在胰腺癌細胞系中的作用機理提供實驗材料。
　　方法：收集蘭州大學第一醫(yī)院普外科2010年至2013年間的胰腺癌石蠟包埋切塊。選擇病理診斷明確、病理和隨訪資料完整的71例標本，采用免疫組化方法，檢測SFRP5在胰腺癌及癌旁組織中的表達情況，并分析SFRP5的表達情況與

2、臨床病理因素及患者預后的關系；利用Western-bloting和qRT-PCR方法，提取新鮮組織中的蛋白和mRNA，檢測SFRP5蛋白和SFRP5 mRNA在胰腺癌新鮮組織中的表達情況。根據(jù) GenBank上公布的人 SFRP5基因信息，構建SFRP-shRNA慢病毒干擾載體，通過293T細胞進行慢病毒包裝，并測定病毒滴度。
　　結果：SFRP5蛋白在胰腺癌組織中的表達明顯低于癌旁組織（40.8％ vs85.7%，P<0.05）

3、，SFRP5蛋白表達與胰腺癌患者的TNM分期（P<0.05）、遠處轉移（P<0.05）、胰周侵犯（P<0.05）及預后具有相關性，并且是胰腺癌患者預后的獨立影響因素。成功構建SFRP5-shRNA慢病毒載體，轉染293T細胞后在熒光顯微鏡下可見綠色熒光，并進行病毒包裝，純化出慢病毒顆粒，測得其滴度1*109 TU/ml。
　　結論：SFRP5蛋白在胰腺癌中表達消失，是影響胰腺癌患者預后的獨立影響因素，SFRP5低表達、存在遠處轉移