內(nèi)源性大麻素2-AG通過調(diào)控大麻素受體參與保留神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)病理痛.pdf

1、目的：通過選擇性阻斷大麻素受體CB1或CB2，觀察內(nèi)源性大麻素2-AG對(duì)保留神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)病理痛的抑制效應(yīng)，以及是否能夠翻轉(zhuǎn)該抑制效應(yīng)，從而明確具體哪個(gè)大麻素受體在2-AG發(fā)揮的鎮(zhèn)痛效應(yīng)中起關(guān)鍵性作用。
　　方法：通過對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)分支部分損傷，構(gòu)建神經(jīng)病理痛動(dòng)物模型----SNI模型(Spared nerve injury model。SNI model)，行為學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察：大鼠機(jī)械痛閾----50％爪縮閾值(50% Paw

2、withdrawal mechanical threshold,50%PWT)的改變情況；鞘內(nèi)單次注射內(nèi)源性大麻素2-AG，觀察其對(duì)大鼠機(jī)械痛敏的抑制效應(yīng)；2-AG分別聯(lián)合應(yīng)用大麻素受體1或大麻素受體2特異性阻斷劑(AM281或 AM630)，觀察這兩種受體阻斷劑對(duì)2-AG鎮(zhèn)痛效應(yīng)的翻轉(zhuǎn)情況。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)和蛋白印跡實(shí)驗(yàn)，觀察上述干預(yù)措施后，大麻素受體亞型和星形膠質(zhì)細(xì)胞的共表達(dá)情況，以及星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)的關(guān)鍵酶--

3、--谷氨酰胺合成酶(GS)的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：行為學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，大鼠坐骨神經(jīng)分支部分損傷后(SNI模型)第四天，測(cè)定大鼠的50%PWT，發(fā)現(xiàn)其機(jī)械閾值顯著下降(1.57g)并出現(xiàn)明顯的機(jī)械痛敏；鞘內(nèi)給予2-AG后，明顯地抑制了大鼠的機(jī)械痛敏，大鼠的機(jī)械痛閾顯著上升(13.67g)，與SNI組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F(1,71)=318.75,P<0.01)，同時(shí)觀察到2-AG的鎮(zhèn)痛效應(yīng)可持續(xù)30min；CB1受體阻斷后，大鼠的

4、機(jī)械痛閾明顯下降，翻轉(zhuǎn)了2-AG對(duì)機(jī)械痛敏的抑制效應(yīng)(F(1,71)=346.20,P<0.01)，持續(xù)觀察60min翻轉(zhuǎn)效應(yīng)仍然存在；CB2受體阻斷后，僅在45~60min時(shí)翻轉(zhuǎn)了2-AG的抑制效應(yīng)，與2-AG組相比差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F(1,71)=10.81,P=0.022<0.05)。細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究結(jié)果顯示，在SNI模型組，腰段脊髓背角的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞均不同程度的被激活，其中星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活的最為明顯，GFAP、

5、CB1受體的表達(dá)水平同空白對(duì)照組(Na?ve組)相比較表達(dá)明顯增強(qiáng)，并且GFAP和CB1受體共表達(dá)水平亦明顯上調(diào)(均P<0.05)；鞘內(nèi)注射2-AG后腰段脊髓背角的星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)程度與SNI組比較受到一定的抑制，同時(shí)CB1受體的表達(dá)和GFAP/CB1受體的共表達(dá)水平也明顯下調(diào)(均P<0.05)；陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果還顯示，CB1、CB2受體單獨(dú)阻斷組中，GFAP、CB1和GFAP/CB1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著高于2-AG組(均P<0.05

6、)；CB2受體在各組織染色中均未出現(xiàn)明顯的陽(yáng)性標(biāo)記。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)損傷(SNI組)后GS的蛋白表達(dá)水平與Naive組比較明顯提高(t=20.22,P<0.01)；2-AG組顯著抑制了SNI組GS的高表達(dá)(t=13.08,P<0.01)；CB1阻斷組GS蛋白的表達(dá)同2-AG組比較明顯上調(diào)(t=6.91,P<0.01)；CB2阻斷組GS蛋白的表達(dá)同2-AG組比較無明顯差異(t=2.81,P=0.186>0.05)。
　　結(jié)論：