RIG-I抑制胰島β細胞增殖機制研究.pdf

1、目的:RIG-Ⅰ(retinoic acid inducible gene-Ⅰ)是一個典型的胞內模式識別受體，能識別胞內病毒雙鏈RNA，激活并參與多種炎癥因子表達的調節(jié)。最近有研究表明:1型糖尿病中，RIG-Ⅰ能激活，且參與胰島β細胞功能下調及糖尿病的發(fā)生。而RIG-Ⅰ是否參與2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展并不清楚。本研究旨在探討RIG-Ⅰ對胰島β細胞增殖的調控機制極其對β細胞功能失代償?shù)挠绊憽?br>　　方法:采用糖脂毒性（0.4 mM棕櫚酸+

2、16.7 mM葡萄糖）、炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF-α)及脂多糖(LPS)刺激胰島Min6細胞，并提取糖尿病db/db小鼠的胰島，建立胰島β細胞體外和體內2型糖尿病模型。免疫印跡(Westernblot)技術分別檢測激活的原癌基因Src(sarcoma gene)及RIG-Ⅰ的蛋白水平變化;免疫熒光觀察磷酸化Src(Y416)及RIG-Ⅰ的含量變化;EdU熒光標記、流式細胞術分別評價細胞增殖及細胞周期進程的變化。給予RIG-Ⅰ特異性激

3、活劑維甲酸(retinoic acid，RA)激活RIG-Ⅰ，Real-time RT-PCR和Western blot測定RIG-Ⅰ的mRNA水平及蛋白水平;噻唑藍(MTT)法檢測胰島β細胞的生長活力，EdU熒光標記分析胰島β細胞增殖情況，并用流式細胞術評價胰島β細胞的周期進程變化。采用胰島素樣生長因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ，IGF-Ⅰ)和維甲酸聯(lián)合處理Min6細胞，實時定量RT-PCR和免疫印

4、跡分別檢測Src基因下游信號分子Skp2、STAT3(Signal Transducer and Activator of Transcription3,STAT3)及細胞周期蛋白cyclin D1、E、CDK2、P27和p21的mRNA和蛋白水平;免疫熒光觀察磷酸化STAT3亞細胞定位;熒光素酶報告基因實驗(Luciferase Assay)分析STAT3的轉錄活性;免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)檢測p-S

5、rc分別與RIG-Ⅰ、STAT3的蛋白結合變化。
　　結果:糖脂毒性(glucolipotoxicity)、炎癥因子（TNF-α）及脂多糖(LPS)能顯著上調胰島β細胞磷酸化Src及RIG-Ⅰ的蛋白水平;上調的RIG-Ⅰ導致胰島β細胞的增殖能力和生長活力都明顯下降，細胞凋亡增加，且細胞周期阻滯于G1期;胰島素樣生長因子-Ⅰ處理Min6細胞后，RIG-Ⅰ的激活對cyclin D1、E、CDK2、P27和p21的mRNA水平均無顯著影

6、響，但誘導P27蛋白含量顯著上調;RIG-Ⅰ激活也抑制了Src基因下游信號分子Skp2的表達、減弱了磷酸化STAT3的轉錄活性且阻礙了Src與STAT3的蛋白相互結合。
　　結論:糖脂毒性、炎癥因子(TNF-α)及脂多糖(LPS)能顯著激活胰島β細胞的Src活性。RIG-Ⅰ的上調能競爭性結合激活Src，從而阻礙p-Src與STAT3的蛋白結合，下調Skp2的蛋白水平和上調周期蛋白P27的表達，最終誘導胰島β細胞G1期阻滯，抑制其增