依托咪酯對大鼠未成熟睪丸間質(zhì)細胞類固醇激素合成的影響.pdf

1、背景:依托咪酯是速效催眠靜脈麻醉藥。依托咪酯的主要副作用是引起糖皮質(zhì)激素的血漿濃度降低，導(dǎo)致腎上腺的異常反應(yīng)。皮質(zhì)醇和睪酮合成具有類似的生物合成途徑，共同使用常見的類固醇合成酶，如細胞色素P450側(cè)鏈裂解酶(CYP11A1)和3β-羥類固醇脫氫酶1(HSD3B1)。依托咪酯對睪丸間質(zhì)細胞成熟過程中類固醇激素合成的作用是不確定的。
　　方法:從35日齡大鼠分離出不成熟的睪丸間質(zhì)細胞加入30μM依托咪酯培養(yǎng)3小時，同時分別加入促黃體生

2、成激素(LH)、環(huán)腺苷(8Br-cAMP)、22R-OH-膽固醇、孕烯醇酮、孕酮、睪酮、雙氫睪酮和雄烯二酮。采用放射免疫法測定培養(yǎng)基中5α-雄烷二醇和睪酮的濃度。睪丸間質(zhì)細胞加入不同濃度的依托咪酯（0.3-30μM）培養(yǎng)3小時，并提取總RNA。熒光定量PCR測定以下基因mRNA水平:Lhcgr, Scarb1，Star,Cyp11a1，Hsd3b1，Cyp17a1，Hsd17b3，Srd5a1和Akr1c14。從35日齡大鼠睪丸制備線粒

3、體和微粒體用來檢測依托咪酯對CYP11A1和HSD3B1活性的直接作用。
　　結(jié)果:在完整的睪丸間質(zhì)細胞，30μM依托咪酯顯著抑制雄激素合成。進一步的研究表明，依托咪酯抑制LH刺激雄激素的產(chǎn)生。在純化的睪丸線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，依托咪酯完全抑制CYP11A1和HSD3B1的活性，半數(shù)抑制濃度(IC5。)分別是12.62μM和2.75μM。此外，依托咪酯抑制類固醇激素合成相關(guān)基因的表達。依托咪酯濃度為0.3μM時，顯著抑制Akr1c14基