鹽脅迫對發(fā)菜細胞生理生化特征的影響.pdf

1、本課題旨在探究鹽脅迫對發(fā)菜生理生化特性的影響變化,從而為發(fā)菜資源保護和抗逆機制的探究提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。主要內容包括了發(fā)菜細胞形態(tài)、亞顯微結構、生長狀態(tài)、光合色素、多糖、蛋白質、脯氨酸等各項指標的響應變化,同時對鹽脅迫誘導的發(fā)菜細胞膜脂過氧化損傷和相應的抗氧化酶活性變化進行了探討,最后對鹽脅迫下發(fā)菜細胞所合成的胞外多糖物質進行分離純化并進行初步結構和理化性質鑒定。主要研究結果如下:
　　1.鹽脅迫下,發(fā)菜細胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,

2、藻體正常鏈式逐步瓦解,藻絲體逐漸斷裂成較短的藻殖段或裂為單個細胞,細胞呈現(xiàn)團聚生長,胞外多糖合成增多,粘液層增厚。胞內類囊體的擴增與重排帶來了附著其上的光合粒子的增加及重新分布。包括羧酶體、藻青素、聚葡糖顆粒、異染質、聚-β-羥基丁酸(PHB)和氣泡在內的細胞內含物也發(fā)生了相應變化。
　　2.鹽脅迫下,發(fā)菜細胞的正常生長受到抑制,鹽濃度越高這種抑制作用越明顯。在新的穩(wěn)定增長趨勢建立之前,細胞會出現(xiàn)一個初始生長停滯階段。鹽脅迫未影響

3、細胞光合色素的組成,但抑制了葉綠素a與藻藍素的合成。與此同時,類胡蘿卜素合成增加。胞外多糖、胞內可溶性糖、脯氨酸、蛋白質等滲透調節(jié)物質大量積累。鹽脅迫誘導的過氧化反應加劇,細胞膜通透性增加,丙二醛不斷積累,抗過氧化酶防御系統(tǒng)在發(fā)菜抗氧化機制中發(fā)揮著重要作用。
　　3.對鹽脅迫后發(fā)菜胞外多糖進行濃縮,脫蛋白,醇析得到粗多糖,再經DEAE纖維素52離子交換層析得到2個多糖組分NFEPS-A和NFEPS-B。通過葡聚糖凝膠Sephade

4、x G100對NFEPS-A進行進一步的分離純化,得到不同分子量范圍的2個峰,命名為NFEPS-A1和NFEPS-A2。聚丙烯酰胺電泳實驗表明其均為單一純品。
　　4.凍干后的NFEPS-A2純品呈白色粉末,可溶于水,不溶于有機溶劑。組分中不含淀粉,不具有較短側鏈和較少分支。組分中不含有氨基酸或其他氨基化合物,也不含有還原性醛基或酮基。多糖的掃描電鏡分析表明,NFEPS-A2具有多孔結構和粗糙的表面。紫外掃描顯示,組分中不含有裸露

5、或游離的核酸和蛋白質。紅外光譜顯示,該多糖存在有分子內以及分子間氫鍵,同時分子中存在 C-H鍵伸縮振動和OH的變形振動,具有甘露吡喃糖的特征吸收,屬于非硫化多糖。氣相色譜-質譜聯(lián)用分析得到該多糖的主要包括D-葡萄糖、D-果糖、D-木糖、D-半乳糖、阿拉伯糖、塔羅糖、阿洛糖等單糖。自由基清除活性實驗表明,NFEPS-A2組分對羥自由基(·OH)和超氧陰離子自由基(O2-·)的清除效率達到了46.79％和40％。相較于正常生長的發(fā)菜胞外多糖